Restrictiefragmentlengtepolymorfismeanalyse

Het wijdverbreide gebruik van verschillende restrictie-endonucleasen voor de analyse van chromosomaal DNA heeft de enorme variabiliteit van het menselijk genoom onthuld. Zelfs kleine veranderingen in de coderende en regulerende regio's van structurele genen kunnen leiden tot het stoppen van de synthese van een bepaald eiwit of tot het verlies van de functie ervan in het menselijk lichaam, wat meestal het fenotype van de patiënt beïnvloedt. Ongeveer 90% van het menselijk genoom bestaat echter uit niet-coderende sequenties, die variabeler zijn en veel zogenaamde neutrale mutaties, of polymorfismen, bevatten en geen fenotypische expressie hebben. Dergelijke polymorfe regio's (loci) worden gebruikt als genetische markers bij de diagnose van erfelijke ziekten. Polymorfe loci zijn aanwezig in alle chromosomen en zijn gekoppeld aan een specifieke regio van het gen. Door de lokalisatie van een polymorfe locus te bepalen, is het mogelijk vast te stellen welk gen geassocieerd is met de mutatie die de ziekte bij de patiënt heeft veroorzaakt.

Om polymorfe DNA-regio's te isoleren, worden bacteriële enzymen gebruikt - restrictasen, die restrictieplaatsen zijn. Spontane mutaties die optreden in polymorfe plaatsen maken ze resistent of juist gevoelig voor de werking van een specifieke restrictase.

Mutationele variabiliteit in restrictieplaatsen kan worden gedetecteerd door de lengte van restrictiefragmenten van DNA te veranderen door ze te scheiden met behulp van elektroforese en vervolgens te hybridiseren met specifieke DNA-probes. Bij afwezigheid van restrictie in een polymorfe plaats zal één groot fragment worden gedetecteerd op elektroforegrammen, en indien aanwezig, zal een kleiner fragment aanwezig zijn. De aanwezigheid of afwezigheid van een restrictieplaats op identieke loci van homologe chromosomen maakt een redelijk betrouwbare labeling van het mutante en normale gen mogelijk en het volgen van de overdracht ervan op nakomelingen. Bij het bestuderen van DNA van patiënten in beide chromosomen waarvan een restrictieplaats aanwezig is in een polymorfe regio, zullen dus korte DNA-fragmenten worden gedetecteerd op het elektroforegram. Bij patiënten die homozygoot zijn voor een mutatie die de polymorfe restrictieplaats verandert, zullen langere fragmenten worden gedetecteerd, en bij heterozygote patiënten zowel korte als lange fragmenten.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]