Medisch expert van het artikel
Nieuwe publicaties
PCR als methode voor het diagnosticeren van genetische ziekten
Laatst beoordeeld: 04.07.2025
Alle iLive-inhoud wordt medisch beoordeeld of gecontroleerd op feiten om zo veel mogelijk feitelijke nauwkeurigheid te waarborgen.
We hebben strikte richtlijnen voor sourcing en koppelen alleen aan gerenommeerde mediasites, academische onderzoeksinstellingen en, waar mogelijk, medisch getoetste onderzoeken. Merk op dat de nummers tussen haakjes ([1], [2], etc.) klikbare links naar deze studies zijn.
Als u van mening bent dat onze inhoud onjuist, verouderd of anderszins twijfelachtig is, selecteert u deze en drukt u op Ctrl + Enter.
PCR is een nieuwe ontwikkeling binnen de moleculaire genetica. Het wordt gebruikt voor DNA-amplificatie en maakt snelle in-vitrovermenigvuldiging van een specifieke DNA-regio (d.w.z. elk gen van interesse) mogelijk, meer dan 200.000 keer. Om de reactie uit te voeren, is DNA-materiaal van één cel voldoende; de hoeveelheid DNA die door PCR wordt geamplificeerd, is zo groot dat dit DNA eenvoudig kan worden gekleurd (het gebruik van radioactieve probes na elektroforese is niet nodig). Een voorwaarde voor het uitvoeren van PCR is kennis van de nucleotidesequentie van de geamplificeerde DNA-regio voor de juiste selectie van kunstmatig gesynthetiseerde primers.
PCR is momenteel een proces met één buisje, bestaande uit herhaalde cycli van amplificatie (reproductie, kopiëren) van een specifieke DNA-molecuulsequentie om een voldoende groot aantal kopieën te verkrijgen dat door elektroforese kan worden geïdentificeerd. Een van de belangrijkste componenten van de reactie zijn "primers" - synthetische oligonucleotiden bestaande uit 20-30 basen die complementair zijn aan de "plaatsen" (gebieden) van annealing (aanhechting) op het geïdentificeerde gebied van het matrix-DNA.
PCR vindt automatisch plaats in een programmeerbare thermostaat - een thermocycler (amplifier). De drietrapscyclus, die resulteert in exacte kopieën van het geïdentificeerde stukje matrix-DNA, wordt 30-50 keer herhaald volgens het gespecificeerde thermocyclerprogramma. In de eerste cyclus hybridiseren oligoprimers met het oorspronkelijke matrix-DNA en vervolgens (in volgende cycli) met nieuw gesynthetiseerde DNA-moleculen naarmate deze zich ophopen in het reactiemengsel. In het laatste geval eindigt de DNA-synthese niet als gevolg van een temperatuurverandering, maar bij het bereiken van de DNA-polymeraselimiet van het geamplificeerde stukje, die de grootte van het nieuw gesynthetiseerde DNA-stukje tot op één nucleotide nauwkeurig bepaalt.
Voor het detecteren van de verkregen DNA-moleculen wordt elektroforese gebruikt, waarbij het versterkte materiaal wordt gescheiden op basis van de grootte van de amplicons (versterkingsproducten).
PCR kan worden gebruikt om de locatie van vermoedelijke mutaties of polymorfe plekken direct te onderzoeken, maar ook om de aanwezigheid van andere specifieke DNA-kenmerken te bestuderen.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]