Medisch expert van het artikel
Nieuwe publicaties
PCR als een methode voor het diagnosticeren van genetische ziekten
Laatst beoordeeld: 23.04.2024
Alle iLive-inhoud wordt medisch beoordeeld of gecontroleerd op feiten om zo veel mogelijk feitelijke nauwkeurigheid te waarborgen.
We hebben strikte richtlijnen voor sourcing en koppelen alleen aan gerenommeerde mediasites, academische onderzoeksinstellingen en, waar mogelijk, medisch getoetste onderzoeken. Merk op dat de nummers tussen haakjes ([1], [2], etc.) klikbare links naar deze studies zijn.
Als u van mening bent dat onze inhoud onjuist, verouderd of anderszins twijfelachtig is, selecteert u deze en drukt u op Ctrl + Enter.
PCR is een nieuwe prestatie in moleculaire genetica, gebruikt voor DNA-amplificatie en maakt het mogelijk dat het specifieke deel van DNA (dat wil zeggen, elk gen van belang) snel meer dan 200.000 keer in vitro wordt gerepliceerd . Voor het uitvoeren van de reactie is het voldoende om het DNA-materiaal van één cel te hebben; de hoeveelheid DNA geamplificeerd door PCR is zo groot dat dit DNA eenvoudig kan worden gekleurd (met behulp van radioactieve sondes nadat elektroforese niet vereist is). Een vereiste voor het uitvoeren van PCR is de kennis van de nucleotidesequentie van het geamplificeerde DNA-gebied voor de juiste selectie van kunstmatig gesynthetiseerde primers.
Momenteel, PCR is een proces dat optreedt in een enkele buis bestaande uit herhalende cycli van amplificatie (reproductie, kopiëren) van specifieke DNA-sequenties om een voldoende groot aantal kopieën dat kan worden geïdentificeerd door elektroforese verkrijgen. Een sleutelcomponent van de reactie - "primers" - synthetische oligonucleotiden bestaande uit 20-30 basen complementair "sites" (gebieden) annealing (verbinding) aan de identificeerbare gedeelte van het matrijs-DNA.
PCR verloopt automatisch in een programmeerbare thermostaat - thermocycler (thermocycler). De driestapscyclus, die resulteert in replica's van het identificeerbare gedeelte van het matrijs-DNA, wordt 30 tot 50 keer herhaald in overeenstemming met het vooraf ingestelde programma van de thermische cycler. In de eerste cyclus hybridiseren de oligoprameren met het oorspronkelijke matrijs-DNA en vervolgens (in daaropvolgende cycli) en met de nieuw gesynthetiseerde DNA-moleculen terwijl ze zich in het reactiemengsel verzamelen. In het laatste geval eindigt de synthese van DNA niet als gevolg van een verandering in het temperatuurregime, maar bij het bereiken van de DNA-polymerasegrenzen van het geamplificeerde gebied, dat de grootte van het nieuw gesynthetiseerde DNA-gebied tot binnen één nucleotide bepaalt.
Als een werkwijze voor het detecteren van de verkregen DNA-moleculen, wordt elektroforese gebruikt, door middel waarvan het geamplificeerde materiaal wordt verdeeld volgens de grootte van amplicons (amplificatieproducten).
Met behulp van PCR is het mogelijk om de locaties van lokalisatie van vermoedelijke mutaties of polymorfe locaties direct te onderzoeken, en ook om de aanwezigheid van andere specifieke kenmerken van DNA te bestuderen.
[