Confocale microscopie

Confocale microscopie wordt momenteel beschouwd als een van de meestbelovende methoden voor in-vivo-beeldvorming van de huid. Daarom is de belangstelling ervoor buitengewoon groot, zowel bij clinici als bij vertegenwoordigers van onderzoeksinstituten.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Confocale microscopiemogelijkheden

In de dermatologie wordt confocale lasermicroscopie gebruikt voor:

• studie van de penetratie van stoffen in de huid (penetratieroutes, kinetiek, distributie in de huid);
• observatie van de werking van de klieren (bepaling van de actieve en passieve toestand);
• studies van de microcirculatie (ook in real time);
• diagnostiek van neoplasmata.

Zonder de voor- en nadelen van de hierboven genoemde soorten confocale microscopie te bespreken, merken we op dat fluorescentielaserconfocale microscopie de laatste jaren steeds populairder is geworden.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Confocale microscopie voor huidonderzoek

De confocale microscoop biedt twee onschatbare mogelijkheden: het bestuderen van weefsels op cellulair niveau in een staat van fysiologische vitale activiteit en het demonstreren van de resultaten van het onderzoek (d.w.z. cellulaire activiteit) in vier dimensies: hoogte, breedte, diepte en tijd. Voor de beeldkwaliteit en de diepte van het onderzoek speelt het lichtdoorlatende vermogen van het weefsel, oftewel de transparantie ervan, de belangrijkste rol. De confocale microscopiemethode is contactloos; de lichtbundel veroorzaakt geen schade of ongemak voor de onderzochte patiënt of het proefdier.

Confocale scanning lasermicroscopie (CSLM) wordt gebruikt om de huid te onderzoeken. Deze methode maakt het mogelijk om de opperhuid en de papillaire laag van de lederhuid te bekijken met een resolutie die bijna histologisch is. Alle onderzoeksresultaten worden weergegeven op de monitor en opgeslagen als een pakket beeldbestanden (als microfilm (in de dynamiek) of microfoto's).

Er zijn twee soorten van deze methode:

• reflecterend (reflectantie CSLM) - gebaseerd op het feit dat verschillende intracellulaire en intercellulaire structuren verschillende brekingsindices van licht hebben, waardoor het verkrijgen van een contrasterend beeld mogelijk is.
• Fluorescentie (CSLM) - maakt gebruik van laserlicht dat de huid binnendringt en exo- of endochromoforen in de huid aanspreekt, die als reactie fotonen gaan uitzenden (d.w.z. fluoresceren).

Laterale resolutie is de minimale afstand tussen punten op een horizontaal vlak, d.w.z. een vlak evenwijdig aan het huidoppervlak. Axiale resolutie is de minimale afstand tussen punten op een vlak loodrecht op het huidoppervlak.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Geschiedenis van confocale microscopie

Het idee om een microscoop te creëren die een deel van levend weefsel op cellulair niveau kon weergeven, werd 130 jaar geleden al actief ontwikkeld. Het belangrijkste element van moderne microscopen werd eind 19e eeuw ontworpen en was een roterende schijf met kleine gaatjes in een spiraalvorm. Deze schijf werd in 1883 uitgevonden door de Duitse student Paul Nipkow, naar wie hij zijn naam kreeg: de Nipkow-schijf (of Nipkow-schijf). De uitvinding was gebaseerd op het vermogen van licht, dat door kleine gaatjes in de schijf en een vergrootglas viel, om diep in het weefsel door te dringen en een celfragment op afstand van het oppervlak te belichten. Wanneer de schijf snel draait, vormen de fragmenten één enkel beeld. Door de structuur van het object af of dichterbij te bewegen, is het mogelijk om de diepte van het optische deel van het te bestuderen weefsel te variëren.

Pas met de komst van videorecorders in de jaren 80 en computers die beelden konden verwerken in het begin van de jaren 90, werd het mogelijk om de moderne microscopen die we vandaag de dag gebruiken, te ontwikkelen en effectief te gebruiken.