Immunofenotypering van hemoblastoses

Aanzienlijke vooruitgang in hematologische studies geassocieerd in de afgelopen jaren met het gebruik van moderne immunologische methoden en geautomatiseerde hulpmiddelen voor het analyseren en sorteren van cellen van het perifere bloed en beenmerg - flowcytometers. Traditionele morfologische en cytochemische studie van het substraat cel ziekte (bloed, rode beenmerg, lymfeklieren, milt, enz.), In veel gevallen, vooral in lymfoproliferatieve ziekten, niet onthullen de hele verscheidenheid aan opties onder morfologisch soortgelijke vormen en identificeren van de oorsprong van de pathologische kloon . Deze problemen kunnen alleen worden opgelost door de immunologische kenmerken van cellen te bestuderen. Elke fase van differentiatie van hematopoietische cellen heeft zijn eigen set van antigenen die op de internationale classificatie die bekend staat als differentiatie en differentiatie zijn onderverdeeld in clusters, aangeduid met CD.

In blok differentiatie van neoplastische veranderingen optreden in elk stadium van de normale celontwikkeling, wat resulteert in een pathologische celkloon definiëren substraat ziekte en dezelfde immunologische (of fenotypische) kenmerk. Na studie van deze merkers in cellen kan bepaald worden met elke vorm of uitvoeringsvorm van de ziekte consistente, d.w.z. Op basis van immunologische celfenotype differentiële diagnose, het moeilijkste lymfoproliferatieve aandoeningen, omdat de belangrijkste celsubstraat pathologische aandoeningen zijn bijna hetzelfde type cellen morfologisch.

Fenotypering maakt typering van ontploffings- en volwassen bloedcellen van de myelo-, mono- en lymfocytische reeks met behulp van monoklonale antilichamen mogelijk door de aanwezigheid van differentiatie-antigenen (receptoren) in de celwand. In de sectie "Evaluatie van de immuunstatus van het organisme" worden de kenmerken en diagnostische betekenis van celmarkers gedeeltelijk beschreven; Hieronder volgt een korte beschrijving van antigene celmarkers toegepast op de diagnose van hemoblastosis. Op de membranen van bloedcellen en rood beenmerg kunnen de volgende antigenen (markers) worden geïdentificeerd.

• CD2 is een monomeer transmembraan glycoproteïne. Het is aanwezig op het oppervlak van alle circulerende T-lymfocyten en sommige NK-lymfocyten. CD2 neemt deel aan het proces van alternatieve activering van T-lymfocyten. Detectie van CD2 met behulp van monoklonale antilichamen in de klinische praktijk wordt gebruikt voor fenotypering van acute T-cel leukemieën, lymfomen, chronische inflammatoire en immunodeficiënte aandoeningen.
• CD3 - een eiwitcomplex geassocieerd met een antigeen-specifieke T-celreceptor, is de belangrijkste functionele marker van T-lymfocyten. Het vergemakkelijkt de overdracht van activeringssignalen van het membraan naar het cytoplasma van de cel. CD3-detectie is geïndiceerd voor de diagnose van acute T-celleukemie, lymfoom (CD3 komt niet tot expressie in niet-T-cel lymfoïde tumoren) en immunodeficiëntieziekten.
• CD4 - transmembraan glycoproteïne tot expressie op een subset van T-helper (spoelen) die 45% van perifere bloedlymfocyten. In de vroege stadia van de ontwikkeling van lymfocyten in de thymus, CD4 antigenen, alsmede CD8, uitgedrukt alle corticale lymfocyten. Medullaire thymocyten, die vergelijkbaar is met het fenotype van rijpe CD4 + perifere T-cellen (helper T-cellen), hetzij reeds tot expressie CD4 of CD8-receptoren. In perifeer bloed worden tot 5% van de cellen tegelijkertijd gemerkt als CD4 en CD8. Lichte expressie van CD4 is mogelijk op sommige monocytcellen. CD4 tot expressie in de meeste gevallen, T-cellymfoom, zoals mycosis fungoides, en HTLV-geassocieerde T-cel leukemie (HTLV - human T-lymphotropic virus - menselijk T-lymfotroop virus).
• CD5 - een glycoproteïne met een enkele keten, aanwezig op alle rijpe T-lymfocyten en de meeste thymocyten, wordt zwak tot expressie gebracht door B-lymfocyten. CD5 wordt gedetecteerd op neoplastische cellen van B-cel chronische lymfocytische leukemie en centro-cytische lymfoom. Bij andere vormen van kwaadaardige lymfoïde ziekten - folliculair lymfoom, haarcelleukemie, grootcellig lymfoom - wordt CD5 niet tot expressie gebracht.
• CD7 is een enkelstrengs eiwit, de vroegste marker van T-celdifferentiatie. Het wordt tot expressie gebracht door pro-T-lymfocyten zelfs voordat ze migreren naar de thymus. CD7 wordt gedetecteerd op de meeste NK-cellen, zwakke expressie wordt genoteerd op monocyten. B-lymfocyten en granulocyten bevatten dit antigeen niet. De definitie van CD7 wordt gebruikt voor de diagnose van lymfomen, T-cel lymfoblastische leukemie bij kinderen.
• CD8 is een eiwit dat bestaat uit twee polypeptideketens verbonden door disulfidebruggen. Het wordt uitgedrukt door een subpopulatie van cytotoxische en suppressor-T-lymfocyten, die 20-35% van perifere bloedlymfocyten omvatten. Dit antigeen heeft ook NK-lymfocyten, corticale thymocyten, 30% medullaire thymocyten en een subpopulatie van rode beenmergcellen. CD8 wordt onderzocht op kwantitatieve evaluatie van het T-suppressor-gehalte (zie rubriek "T-lymfocyten-suppressors in het bloed" hierboven).

• CD10 is het endopeptidase geassocieerd met het celmembraan. CD10 brengt jonge vormen van B-lymfocyten tot expressie en een subpopulatie van corticale lymfocyten. CD10 brengt alle cellen van ALL tot expressie.
• CD11c brengen macrofagen, monocyten, granulocyten, NK-cellen en cellen van leukocyten van de harige cellen op het celmembraan tot expressie.
• CD13 is een glycoproteïne dat tot expressie wordt gebracht door myelomonocytische cellen (progenitorcellen, neutrofielen, basofielen, eosinofielen, monocyten en myeloïde leukemiecellen). Het is afwezig in T- en B-lymfocyten, erythrocyten en bloedplaatjes.
• CD14 is een glycoproteïne aan het oppervlakmembraan. Het wordt voornamelijk tot expressie gebracht door monocyten en macrofagen. CD14 wordt gedetecteerd in meer dan 95% monocyten van perifeer bloed en beenmerg. Sterke expressie van CD14 wordt waargenomen bij acute myeloblastische leukemie. Bij acute en chronische lymfoblastische leukemie wordt dit antigeen niet tot expressie gebracht.
• CD15 is een oligosaccharide. Hij neemt deel aan de processen van fagocytose en chemotaxis. Dit antigeen is aanwezig op het oppervlak van rijpe granulocyten en Berezovsky-Sternberg-cellen. CD15-antigeenexpressie wordt gedetecteerd bij de ziekte van Hodgkin. Bij non-Hodgkin-lymfomen wordt CD15 in de meeste gevallen niet gedetecteerd.
• CD16 wordt tot expressie gebracht op het oppervlak van granulocyten, monocyten, macrofagen en NK-cellen. Alle lymfocyten die dit antigeen tot expressie brengen, hebben het vermogen tot antilichaamafhankelijke cellulaire cytotoxiciteit. CD16 wordt bepaald bij het typen van chronische myelocytische leukemiesoorten om NK-cellen te karakteriseren.
• CD19 is een glycoproteïne dat aanwezig is op alle perifere B-lymfocyten, evenals op alle voorlopercellen van B-cellen. Het is afwezig op plasmacellen. Dit is de vroegste marker van B-cellen, speelt een belangrijke rol bij het reguleren van de activatie en proliferatie van B-lymfocyten. CD19 wordt tot expressie gebracht op alle neoplastische cellen van acute leukemie van B-celoorsprong en is ook aanwezig in sommige vormen van acute monoblastleukemie.
• CD20 is een niet-geglycosyleerd eiwit. In de ontogenese van B-lymfocyten verschijnt het CD20-antigeen na CD19 in het stadium van pre-B-celdifferentiatie van lymfocyten. Het is afwezig op het plasmamembraan van plasmacellen. Het wordt uitgedrukt in ALL, B-cel chronische lymfatische leukemie, harige celleukemie, Burkitt's lymfoom en zeer zelden in acute monoblastleukemie.
• CD21 is een glycoproteïne, in een significante hoeveelheid aanwezig op B-lymfocyten in lymfoïde organen en in een kleine hoeveelheid op B-cellen van perifeer bloed. CD21 is een receptor voor het Epstein-Barr-virus.
• CD22 is een eiwit dat bestaat uit twee polypeptideketens. Het wordt tot expressie gebracht op het membraan van de meeste B-lymfocyten, waaronder progenitorcellen (prolymfocyten). Het antigeen wordt niet tot expressie gebracht op B-lymfocyten (plasmacellen) na activering. De meest uitgesproken expressie van CD22 wordt gedetecteerd op cellen met harige celleukemie, zwak - in myeloïde leukemieën en niet-T-cel ALL.
• CD23 is een glycoproteïne tot expressie gebracht door geactiveerde B-lymfocyten van perifeer bloed in een veel grotere mate. CD23 medieert IgE-afhankelijke cytotoxiciteit en fagocytose door macrofagen en eosinofielen.
• CD25 is een glycoproteïne met een enkele keten geïdentificeerd als een receptor met lage affiniteit voor IL-2. Deze receptor wordt tot expressie gebracht op geactiveerde T-lymfocyten en, bij een lagere dichtheid, op geactiveerde B-cellen. In het perifere bloed van gezonde mensen is het antigeen aanwezig in meer dan 5% van de lymfoïde cellen.
• CD29 is een fibronectine-receptor. Het wordt wijd verspreid in weefsels, het wordt tot expressie gebracht door leukocyten. CD29-detectie op perifere bloedcellen wordt gebruikt om een subpopulatie van T-cellen met een CD4 + CD29 + fenotype, helper type 2 (Th2) genaamd, te typeren. Deze cellen nemen, door de productie van lymfokinen, deel aan de realisatie van de humorale immuunrespons.
• CD33 is een transmembraan glycoproteïne. Het is aanwezig op het oppervlak van cellen van de myeloïde en monocytenreeks. Het wordt gevonden op het oppervlak van monocyten en, in mindere mate, granulocyten van perifeer bloed. Ongeveer 30% van de rode beenmergcellen brengen CD33 tot expressie, waaronder myeloblasten, promyelocyten en myelocyten. Antigen is afwezig op membranen van pluripotente stamcellen. CD33 wordt gebruikt om cellen in myeloïde leukemieën te karakteriseren. Leukemiecellen van lymfoïde en erytroïde oorsprong brengen CD33 niet tot expressie.
• CD34 is een fosfoglycoproteïne, tot expressie gebracht door hematopoïetische progenitorcellen, waaronder monopotente stamcellen. De meest uitgesproken expressie van Ar wordt waargenomen in vroege voorlopers; wanneer de cellen volwassen worden, valt de uitdrukking van de marker terug. CD34 wordt ook gevonden op endotheelcellen. CD34 wordt gebruikt om cellen te karakteriseren in acute myelogene en lymfoblastische leukemie. Bij chronische lymfatische leukemie en lymfomen wordt expressie van CD34-antigeen niet gedetecteerd.

• CD41a wordt tot expressie gebracht door bloedplaatjes en megakaryocyten. Monoklonale antilichamen voor CD41a-detectie worden gebruikt om megakaryoblastische leukemie te diagnosticeren. Met Glązmann-trombasthenie is de expressie van dit antigeen afwezig of aanzienlijk onderdrukt.
• CD42b is een membraanglycoproteïne bestaande uit twee polypeptideketens. De marker bevindt zich op het oppervlak van bloedplaatjes en megakaryocyten. In de klinische praktijk wordt detectie van CD42b gebruikt voor de diagnose van trombocytopathie - Bernard-Soulier-syndroom.
• CD45RA behoort tot de klasse van transmembraan glycoproteïnen. Dit is een gebruikelijk leukocyt-antigeen. Het wordt tot expressie gebracht op het celmembraan van B-lymfocyten, in mindere mate T-lymfocyten en op volwassen medullaire thymocyten. De marker wordt niet tot expressie gebracht door granulocyten.
• CD45RO is een isovorm met een laag molecuulgewicht van CD45RA - een veel voorkomend leukocyt-ag. Ze worden gevonden op T-cellen (geheugen T-lymfocyten), subpopulaties van B-lymfocyten, monocyten en macrofagen. Monoklonale antilichamen tegen CD45RO hebben een wisselwerking met de meeste thymocyten, een subpopulatie van rustende CD4 + en CD8 + T-lymfocyten en rijpe geactiveerde T-cellen. Cellen van myelomonocytische oorsprong, granulocyten en monocyten dragen ook dit antigeen. Het wordt gedetecteerd in centroblastische en immunoblastische lymfomen.
• CD46 - O-geglycosyleerd dimeer. Het is wijd verspreid in weefsels en expressie T- en B-lymfocyten, monocyten, granulocyten, NK-cellen, bloedplaatjes, endotheelcellen, fibroblasten, maar afwezig op het oppervlak van erythrocyten. CD46 biedt weefselbescherming tegen complementactie.
• CD61 is een bloedplaatjesantigeen. Het wordt uitgedrukt op bloedplaatjes van perifeer bloed en rood beenmerg, maar ook op megakaryocyten en megacaryoblasten. De definitie ervan wordt gebruikt als een marker voor acute megakaryoblastische leukemie. Expressie van antigeen is afwezig of onderdrukt bij patiënten met Glanzmann-trombastenia.
• CD95, ook wel Fas of APO-1 genoemd, is een transmembraan glycoproteïne, een lid van de familie van receptoren van tumornecrosefactor. Het wordt uitgedrukt in aanzienlijke hoeveelheden op perifere bloed-T-lymfocyten (CD4 + en CD8 +) en, in mindere mate, op B-lymfocyten en NK-cellen. Dit antigeen wordt ook tot expressie gebracht op granulocyten, monocyten, weefselcellen en neoplastische cellen. Binding van CD95 aan het Fas-ligand (CD95L) induceert apoptose in de cellen.
• CD95L of Fas-ligand, een membraaneiwit dat behoort tot de familie van receptoren van tumornecrosefactor. Dit antigeen wordt tot expressie gebracht door cytotoxische T-lymfocyten, NK-cellen en zeer vaak door tumorcellen; de belangrijkste inductor van apoptose in cellen.
• HLA-DR is een monomorfe determinant van klasse II-moleculen van het belangrijkste humane histocompatibiliteitscomplex (HLA). De marker wordt tot expressie gebracht op Langerhans-cellen, dendritische cellen van lymfoïde organen, bepaalde soorten macrofagen, B-lymfocyten, geactiveerde T-cellen en epitheelcellen van de thymus. De test voor deze marker wordt gebruikt voor het kwantificeren van geactiveerde T-lymfocyten met het fenotype CD3 + HLA-DR +.

Met behulp van een andere selectie van monoklonale antilichamen tegen markers is het mogelijk om een fenotypisch portret van cellen te maken die kenmerkend zijn voor een bepaalde vorm van leukemie.

Naast het gebruik immuunfenotypering technieken voor diagnose en differentiële diagnose van hematologische maligniteiten, vooral van belang keerde hun toepassing bij het behandelingsproces om de toestand van remissie en restantpopulatie leukemische cellen te beoordelen. Het kennen van de fenotypische "portret" van blast cellen in de periode van de diagnose, deze markeringen kan cel leukemische kloon in remissie te vinden, en door de toename van het aantal - voor de ontwikkeling van terugval lang (voor 1-4 maanden) te voorspellen totdat de klinische en morfologische kenmerken.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]