Karyotypering

Voor de studie van chromosomen worden vaak kortetermijnbloedculturen gebruikt, evenals beenmergcellen en fibroblastculturen. Het bloed dat met anticoagulant in het laboratorium wordt afgeleverd, wordt onderworpen aan centrifugatie voor de precipitatie van rode bloedcellen en leukocyten worden gedurende 2-3 dagen geïncubeerd in het kweekmedium. Fytohemagglutinine wordt aan het bloedmonster toegevoegd, omdat het de agglutinatie van erytrocyten versnelt en de deling van lymfocyten stimuleert. De meest geschikte fase voor de studie van chromosomen is de metafase van mitose, dus colchicine wordt gebruikt om de verdeling van lymfocyten in dit stadium te stoppen. Het toevoegen van dit medicijn aan de kweek leidt tot een toename van het aantal cellen dat zich in de metafase bevindt, dat wil zeggen in het stadium van de celcyclus, wanneer de chromosomen het best worden gezien. Elk chromosoom repliceert (produceert zijn eigen kopie) en na geschikte kleuring is zichtbaar in de vorm van twee chromatiden bevestigd aan de centromeer of centrale vernauwing. De cellen worden vervolgens behandeld met een hypotone natriumchloride-oplossing, gefixeerd en gekleurd.

Voor het verven van chromosomen worden de Romanovsky-Giemsa-kleurstof, 2% acetaminomine of 2% acetazarine vaker gebruikt. Ze kleuren chromosomen volledig, uniform (de routinemethode) en kunnen worden gebruikt om numerieke anomalieën van menselijke chromosomen te identificeren.

Om een gedetailleerd beeld te krijgen van de structuur van chromosomen, identificatie (bepaling) van individuele chromosomen of hun segmenten, worden verschillende methoden van differentiële kleuring gebruikt. De meest gebruikte methoden zijn Giemsa, evenals G- en Q-buiging. Een microscopisch onderzoek van het geneesmiddel langs de lengte van het chromosoom onthult een reeks gekleurde (heterochromatine) en ongeverfde (euchromatin) banden. Het karakter van de transversale striatie die in dit geval wordt verkregen maakt het mogelijk om elk chromosoom in de set te identificeren, aangezien de afwisseling van strepen en hun afmetingen strikt individueel en constant zijn voor elk paar.

Metafaseplaten van individuele cellen worden gefotografeerd. Afzonderlijke chromosomen worden uit de foto's gesneden en op volgorde op het vel papier geplakt; zo'n beeld van chromosomen wordt een karyotype genoemd.

Het gebruik van aanvullende kleuring, evenals nieuwe methoden voor het verkrijgen van chromosoompreparaten, die het mogelijk maken de chromosomen in lengte te rekken, verhogen de nauwkeurigheid van cytogenetische diagnostiek aanzienlijk.

Er is een speciale nomenclatuur ontwikkeld om het menselijke karyotype te beschrijven. Het normale karyotype van een man en een vrouw wordt aangeduid als respectievelijk 46, XY en 46, XX. Bij het syndroom van Down, gekenmerkt door de aanwezigheid van een extra chromosoom 21 (trisomie 21), wordt het vrouwenkaryotype beschreven als 47, XX 21+ en mannen - 47, XY, 21+. In aanwezigheid van een structurele anomalie van het chromosoom, is het noodzakelijk om een veranderde lange of korte arm aan te geven: de letter p duidt een korte arm, q een lange arm en een translocatie aan. Dus wanneer de korte arm van chromosoom 5 (het "cat-scream" -syndroom) wordt verwijderd, wordt het vrouwelijke karyotype beschreven als 46, XX, 5p-. De moeder van een kind met translocatie Down-syndroom - een drager van een gebalanceerde translocatie van 14/21 heeft een karyotype van 45, XX, t (14q; 21q). Het translocatie-chromosoom wordt gevormd wanneer de lange armen van chromosoom 14 en 21 samenvloeien, korte schouders verloren gaan.

Elke schouder is verdeeld in districten, en deze op hun beurt - in segmenten, en die en anderen worden aangeduid met Arabische cijfers. De centromeer van het chromosoom is het startpunt voor het tellen van regio's en segmenten.

Aldus worden vier markers gebruikt voor de topografie van chromosomen: chromosoomnummer, schoudersymbool, districtnummer en segmentnummer binnen het gegeven gebied. Bijvoorbeeld 6p21.3 registreerinrichting dat het gaat over de 6 chromosomenpaar, zijn korte arm gebied 21, deel 3. Er zijn meer optionele karakters, met name pter - het uiteinde van de korte arm qter - het uiteinde van de lange arm.

De cytogenetische onderzoeksmethode maakt het mogelijk om deleties en andere veranderingen in chromosomen alleen in de grootte van ongeveer 1 miljoen basen (nucleotiden) te detecteren.

[1], [2], [3], [4]