Polymerase-kettingreactie (PCR) bij de diagnose van infectieziekten

PCR - een van de werkwijzen voor DNA-diagnostiek mogelijk maakt om het aantal kopieën van een detecteerbaar gedeelte van het genoom (DNA) bacteriën of virussen te verhogen is een miljoen keer behulp van een DNA polymerase-enzym. Het segment van het geteste nucleïnezuur voor een bepaald genoom wordt vele malen vermenigvuldigd (geamplificeerd), waardoor het kan worden geïdentificeerd. Eerst wordt een DNA-molecuul bacteriën of virussen door verhitting uit twee ketens, dan in aanwezigheid van de gesynthetiseerde DNA-primers (sequentie van nucleotiden die specifiek zijn voor de gedefinieerde genome) wordt deze binden met complementaire stukken DNA, gesynthetiseerd de tweede streng van het nucleïnezuur na elke primer in aanwezigheid van een thermostabiel DNA- polymerase . Twee DNA-moleculen worden verkregen. Het proces wordt vele malen herhaald. Voor diagnose is één DNA-molecuul, dat wil zeggen één bacterie of een viraal deeltje, voldoende. Reactie van een aanvullende stap - DNA-synthese op het RNA-molecuul met behulp van het enzym reverse transcriptase - heeft laten RNA virussen zoals HCV virus testen. PCR is een driestapsproces dat cyclisch wordt herhaald: denaturatie, primer-hybridisatie, DNA-synthese (polymerisatie). De gesynthetiseerde hoeveelheid DNA wordt geïdentificeerd door ELISA of door elektroforese.

PCR kan worden toegepast in verschillende biologisch materiaal - serum of bloedplasma, schrapen van de urethra, biopsie, pleurale vloeistof, cerebrospinale vloeistof, etc. De eerste PCR werd gebruikt voor de diagnose van infectieziekten zoals hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D virus, CMV infectie, infectieuze seksueel overdraagbare aandoening (gonorroe, afval diynaya, Mycoplasma, Ureaplasma infectie), tuberculose, HIV -infectie, etc.

Het voordeel van PCR bij de diagnose van infectieziekten ten opzichte van andere onderzoeksmethoden is als volgt:

• de veroorzaker van de infectie kan worden gevonden in elke biologische omgeving van het lichaam, inclusief het materiaal dat wordt verkregen door een biopsie;
• Het is mogelijk om infectieziekten in de vroegste stadia van de ziekte te diagnosticeren;
• Een kwantitatieve evaluatie van de resultaten van het onderzoek is mogelijk (hoeveel virussen of bacteriën zijn er in het onderzochte materiaal);
• hoge gevoeligheid van de methode; bijvoorbeeld gevoeligheid van PCR voor detectie van DNA van hepatitis B-virus in het bloed 0.001 pg / ml (ongeveer 4 x 10 ² kopieën / ml), terwijl de gevoeligheid van een DNA-hybridisatie onder toepassing vertakte probes - 2,1 pg / ml (bij benadering 7 × 10 ⁵ kopieën / ml).

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8]