Vitamine A in het bloed

Referentiewaarden (norm) voor de concentratie van vitamine A (retinol) in het bloedserum: bij kinderen van 1-6 jaar - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 jaar - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 jaar - 0,91-2,51 μmol/l; bij volwassenen - 1,05-2,09 μmol/l.

Vitamine A is een in vet oplosbare vitamine en bestaat in twee vormen: vitamine A zelf, oftewel retinol (alleen te vinden in dierlijke producten), en provitamine A, ook wel caroteen genoemd (verkregen uit dierlijke en plantaardige producten), dat in de wanden van het spijsverteringskanaal kan worden omgezet in retinol. Ongeveer 50-90% van de retinol in de voeding wordt in de dunne darm opgenomen en in een chylomicrongebonden complex naar de lever getransporteerd, waar het wordt opgeslagen als retinolpalmitaat. Indien nodig wordt het in de bloedbaan afgegeven als retinol in een complex met vitamine A-bindend eiwit. In het bloedserum bindt het vitamine A-bindend eiwit + retinolcomplex zich aan transthyretine. Vanuit het bloedserum wordt retinol opgenomen door doelcellen, zoals de fotoreceptoren van het netvlies en het epitheel.

Wanneer het lichaam meer vitamine A binnenkrijgt dan de behoefte (180-430 mcg retinol per dag, afhankelijk van leeftijd, geslacht en fysiologische toestand), wordt het overschot opgeslagen in de lever, waar een depot van deze vitamine wordt gevormd. Wanneer de inname van retinol via de voeding wordt verminderd, komen de leverreserves vrij in de bloedbaan, waardoor de retinolconcentratie in het bloedserum op een normaal niveau blijft (boven 0,7 μmol/l). Andere biologisch actieve vormen van vitamine A (retinal en retinoïnezuur) zijn in zeer lage concentraties (onder 0,35 μmol/l) in het bloed aanwezig; retinolesters maken ongeveer 5% uit van de totale hoeveelheid vitamine A (0,1-0,17 μmol/l).

Vitamine A speelt een belangrijke rol in oxidatie-reductieprocessen. Retinol bevordert de vorming van glycogeen in de lever en spieren, helpt het cholesterolgehalte in het bloed te verhogen en neemt deel aan de synthese van steroïden en geslachtshormonen. Het is noodzakelijk voor de groei en vorming van het skelet, de rhodopsine-resynthese, en bevordert ook de normale werking van de slijmvliezen en het integumentaire epitheel van de huid, waardoor metaplasie, hyperkeratose en overmatige afschilfering worden voorkomen. Vitamine A helpt haar, tanden en tandvlees te versterken. De afgelopen jaren is de veelzijdige rol van vitamine A bij het voorkomen van kanker en het reguleren van de immuniteit aangetoond (het is noodzakelijk voor de voltooiing van fagocytose, verhoogt de Ig-synthese, stimuleert de vorming van T-killers, stimuleert T-helpers van type II, enz.). Vitamine A is een actieve antioxidant, die voornamelijk werkt in aanwezigheid van vitamine E; het beschermt vitamine C tegen oxidatie. Vitamine A-tekort wordt beschouwd als een risicofactor voor kwaadaardige neoplasmata. Experimentele studies hebben aangetoond dat een verhoging van het vitamine A-gehalte in de voeding de mediane levensverwachting met 17,5% verhoogt. Zink is een essentiële cofactor in de stofwisseling van vitamine A (noodzakelijk voor de synthese van vitamine A-bindend eiwit).

De gemiddelde dagelijkse behoefte aan retinol voor volwassenen (20-50 jaar) is 1,2 mg (4000 IE; 1 IE komt overeen met 0,3 mcg retinol), voor zwangere vrouwen - 1,5 mg (5000 IE), voor vrouwen die borstvoeding geven - 1,8 mg (6000 IE) en voor mensen ouder dan 60 jaar - 2,5 mg (10.000 IE). Ten minste een derde van de dagelijkse behoefte aan retinol moet in afgewerkte vorm aan het lichaam worden geleverd; de rest kan worden gedekt door de consumptie van carotenoïden, waaruit retinol in het lichaam wordt gevormd. Houd er rekening mee dat ongeveer 30% van de retinol in voedingsmiddelen wordt vernietigd tijdens de warmtebehandeling. De activiteit van retinol is 2 keer hoger dan die van caroteen; bovendien wordt slechts 30-40% van dit laatste in de darm opgenomen. Daarom wordt bij de beoordeling van het dieet aangenomen dat 1 mg retinol ongeveer gelijkstaat aan 6 mg carotenoïden.

Bepaling van retinol (vitamine A) en carotenoïden in bloedserum volgens Bessey zoals gewijzigd door LA Anisimova

Principe van de methode

De bepaling van vitamine A en carotenoïden gebeurt door hydrolyse in een alkalische alcoholoplossing, gevolgd door extractie met een mengsel van organische oplosmiddelen.

Reagentia

• 11 M kaliumhydroxide (KOH) oplossing.
• 96% ethylalcohol.
• 1 M kaliumhydroxide (KOH)-oplossing in 96% ethylalcohol: 1 volume 11 M KOH-oplossing wordt gemengd met 10 volumes 96% ethylalcohol. Het reagens wordt bereid op de dag van het onderzoek. Indien er verkleuring optreedt tijdens het mengen, dient de alcohol vóór gebruik gezuiverd te worden door middel van destillatie.
• Xyleen, chemisch zuiver
• Octaan, chemisch zuiver
• Xyleen-octaanmengsel: bereid door het mengen van gelijke volumes xyleen en octaan.

De onderzoeken worden uitgevoerd met behulp van een spectrofotometer.

Het proces van het bepalen van vitamine A

Bloed afgenomen uit de vinger (ongeveer 1 ml) wordt in een centrifugebuis gedaan en gedurende 20-30 minuten in een glazen beker met warm water (temperatuur 40-45 °C) geplaatst. Om het serum te scheiden, wordt het bloedstolsel voorzichtig langs de rand van de buiswand getrokken met een dunne glazen staaf en gedurende 10 minuten gecentrifugeerd met 3000 toeren per minuut.

0,12 ml serum wordt opgevangen en overgebracht naar een agglutinatiebuis, waaraan vervolgens 0,12 ml 1 M kaliumhydroxide-alcoholoplossing wordt toegevoegd. De inhoud wordt grondig geschud.

Reageerbuisjes met monsters worden gedurende 20 minuten in een waterbad bij een temperatuur van 60° C geplaatst om hydrolyse uit te voeren.

De monsters worden afgekoeld en er wordt 0,12 ml xyleen-octaanmengsel aan toegevoegd. Vervolgens worden ze 10-15 seconden krachtig geschud. Vervolgens worden ze opnieuw afgekoeld en gecentrifugeerd.

De bovenste laag, die vitamine A en carotenoïden bevat, wordt voorzichtig verwijderd met behulp van een pasteurpipet met rubberen bol en overgebracht in microcuvetten.

De monsters worden spectrofotometered bij een golflengte van 328 nm om vitamine A te bepalen, en bij een golflengte van 460 nm om carotenoïden te bepalen.

Na de spectrofotometrie worden de monsters blootgesteld aan ultraviolette straling om vitamine A te vernietigen. Hiervoor wordt een kwartslamp (bactericide lamp) op een afstand van 15-20 cm van de microcuvetten geplaatst, zodat het met vloeistof gevulde deel van de cuvet aan straling wordt blootgesteld; de bestralingstijd bedraagt 45-60 minuten.

De monsters worden opnieuw spectrofotometered bij een golflengte van 328 nm. Het vitamine A-gehalte wordt bepaald door het verschil in extinctiewaarden (optische dichtheid), rekening houdend met de door Bessey berekende coëfficiënt (factor) 637 voor vitamine A.

De berekening wordt uitgevoerd volgens de formule:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Waarbij X het gehalte aan vitamine A is, μg/dl; 637 de coëfficiënt is die Bessey heeft berekend voor de bepaling van vitamine A; E328(1) de optische dichtheid van de oplossing vóór bestraling; E328(2) de optische dichtheid van de oplossing na bestraling.

De coëfficiënt voor het omrekenen van de vitamine A-concentratie van µg/dL naar µmol/L is 0,035.

Het gehalte aan carotenoïden wordt berekend met de formule:

X = 480-E480,

Waarbij X het carotenoïdegehalte is, μg/dl; 480 de door Bessey berekende coëfficiënt voor de bepaling van carotenoïden; E480 de optische dichtheid van de testoplossing.

Opmerking

Volgens Bessey kan bij het uitvoeren van onderzoek een groter of kleiner volume serum worden gebruikt, maar de verhouding ervan tot het volume van de alcoholoplossing moet constant blijven bij elke verandering in het volume (de hoeveelheid) van het xyleen-octaanmengsel.

Het normale gehalte aan vitamine A in het bloedserum bedraagt: bij pasgeborenen en zuigelingen 160-270 μg/l; bij volwassenen 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Het gehalte aan carotenoïden in het bloedserum van volwassenen bedraagt 800-2300 μg/l.