Vitamine A in het bloed

De referentiewaarden (norm) van de concentratie van vitamine A (retinol) in het bloedserum: bij kinderen van 1-6 jaar - 0,7-1,5 μmol / l, 7-12 jaar - 0,91-1,71 μmol / l, 13 -19 jaar - 0,91-2,51 μmol / l; bij volwassenen is dit 1,05-2,09 μmol / l.

Vitamine A heeft betrekking op vet oplosbare en bestaat in twee vormen - het werkelijke vitamine A of retinol (alleen in dierlijke producten) en provitamine A, zogenaamde caroteen (bereid uit dierlijke of plantaardige oorsprong), die kan worden omgezet in retinol in de wanden het spijsverteringskanaal. Ongeveer 50-90% van het met voedsel ingenomen retinol wordt geabsorbeerd in de dunne darm en getransporteerd in het complex dat is gebonden aan de chylomicrons naar de lever, waar het wordt bewaard in de vorm van retinolpalmitaat. Indien nodig wordt het in de bloedbaan afgegeven in de vorm van retinol, wat in combinatie is met vitamine A-bindend eiwit. In het serum bindt het vitamine A-bindende eiwit + retinolcomplex aan transthyretine. Uit serum wordt retinol gevangen door doelwitcellen, zoals retinale fotoreceptoren en epitheel.

Wanneer vitamine A het lichaam binnenkomt boven de behoefte (180-430 μg retinol per dag afhankelijk van leeftijd, geslacht en fysiologische toestand), wordt het teveel in de lever afgezet en vormt het depot van deze vitamine. Met een verminderde inname van retinol uit voedsel worden de levervoorraden in de bloedbaan vrijgegeven, waardoor de retinolconcentratie in het serum op een normaal niveau (boven 0.7 μmol / L) wordt gehouden. Andere biologisch actieve vormen van vitamine A (netvlies en retinezuur) zijn in zeer lage concentraties in het bloed aanwezig (minder dan 0,35 μmol / L); op de esters van retinol is goed voor ongeveer 5% van totaal vitamine A (0,1-0,1 μmol / l).

Vitamine A speelt een belangrijke rol bij oxidatie-reductieprocessen. Retinol bevordert de vorming van glycogeen in de lever en spieren, bevordert de toename van cholesterol in het bloed, neemt deel aan de synthese van steroïde en geslachtshormonen. Het is vereist voor de groei en de vorming van been skelet resynthese van rhodopsine, en ook bij aan de normale werking van de slijmvliezen en epitheel van het deksel huid, het voorkomen van de metaplasie, hyperkeratose en overmatige vervelling. Vitamine A helpt haar, tanden en tandvlees te versterken. De laatste jaren toont verschillende rol van vitamine A in de preventie van kanker en de regulering van de immuniteit (essentieel voor de voltooiing van fagocytose, verhogen de synthese van Ig, stimuleert de productie van killer T-cellen, stimuleert de T-helper type II et al.). Vitamine A - een actieve antioxidant, voornamelijk werkzaam in aanwezigheid van vitamine E; het beschermt vitamine C tegen oxidatie. Een tekort aan vitamine A wordt beschouwd als een risicofactor voor maligne neoplasma's. In experimentele studies werd aangetoond dat een toename van het vitamine A-gehalte in de voeding de mediane levensduur verlengt met 17,5%. Zink is een essentiële cofactor van vitamine A-metabolisme (noodzakelijk voor de synthese van vitamine A-bindend eiwit).

De gemiddelde dagelijkse behoefte aan retinol voor volwassenen (20-50 jaar) is 1,2 mg (4000 IE, 1 IE is gelijk aan 0,3 μg retinol), voor zwangere vrouwen - 1,5 mg (5000 IE), voor borstvoeding - 1, 8 mg (6000 IE), voor mensen ouder dan 60 jaar - 2,5 mg (10.000 IE). Minimaal een derde van de dagelijkse behoefte aan retinol moet in de pasklare vorm aan het lichaam worden toegediend; de rest kan worden opgenomen door het gebruik van carotenoïden, waarvan retinol zich vormt in het lichaam. Er moet rekening worden gehouden met het feit dat ongeveer 30% van retinol in levensmiddelen wordt vernietigd door hun warmtebehandeling. De activiteit van retinol is 2 keer hoger dan die van caroteen, bovendien wordt de laatste slechts 30-40% geabsorbeerd in de darm. Daarom wordt bij de beoordeling van de voedingsinname ervan uitgegaan dat 1 mg retinol ongeveer overeenkomt met 6 mg carotenoïden.

Bepaling van retinol (vitamine A) en carotenoïden in serum volgens Bessey in de aanpassing van LA Anisimova

Principe van de methode

De bepaling van vitamine A en carotenoïden is gebaseerd op hun hydrolyse in een alkalische alcoholoplossing, gevolgd door extractie met een mengsel van organische oplosmiddelen.

Reagentia

• 11 M oplossing van kaliumhydroxide (KOH).
• 96% ethylalcohol.
• 1 M oplossing van kaliumhydroxide (KOH) in 96% ethylalcohol: 1 volume van 11 M KOH-oplossing wordt gemengd met 10 delen 96% ethylalcohol. Het reagens wordt op de dag van het onderzoek bereid. Als er tijdens het mengen vlekken optreden, moet de alcohol vóór gebruik worden gereinigd door middel van destillatie.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Xyleen-octaanmengsel: bereid door gelijke volumes xyleen en octaan te mengen.

De onderzoeken worden uitgevoerd op een spectrofotometer.

Het verloop van de bepaling van vitamine A

Van de vinger afgenomen bloed (ongeveer 1 ml) wordt in het centrifuge-etiket gebracht en gedurende 20-30 minuten in een glazen beker met warm water (temperatuur 40-45 ° C) geplaatst. Om het serum te scheiden, wordt het bloedstolsel zorgvuldig rond de rand van de buis gewikkeld met een dunne glasstaaf en gedurende 10 minuten bij 3000 rpm gecentrifugeerd.

Selecteer 0,12 ml serum en breng dit over in een agglutinatiebuisje en voeg vervolgens 0,12 ml van een 1 M alcohol-kaliumhydroxide-oplossing toe. De inhoud wordt grondig geschud.

Reageerbuizen met sondes worden gedurende 20 minuten bij een temperatuur van 60 ° C in een waterbad geplaatst voor hydrolyse.

De monsters worden gekoeld en er wordt 0,12 ml van een xyleen-octaanmengsel aan toegevoegd, gedurende 10-15 seconden krachtig geschud. Koel opnieuw en centrifugeer.

Verwijder de toplaag met vitamine A en carotenoïden voorzichtig met een Pasteur-pipet met een rubberen blik en breng deze over in microcuvetten.

Monsters zijn spectrofotometrisch bij een golflengte van 328 nm - om vitamine A te bepalen en bij een golflengte van 460 nm - om carotenoïden te bepalen.

Na spectrofotometrie het bestudeerde monster wordt blootgesteld aan ultraviolette straling voor het vernietigen van vitamine A. Daartoe op een afstand van 15-20 cm van kwarts cuvetten stellen (bactericide) lamp, zodat de straling blootgestelde deel van de cuvet, gevuld met vloeistof; de bestralingstijd is 45-60 minuten.

De monsters zijn herhaald spectrofotometrisch bij een golflengte van 328 nm. Het gehalte aan vitamine A wordt bepaald aan de hand van het verschil in extinctiewaarden (optische dichtheid), rekening houdend met de coëfficiënt (factor) 637, berekend door Bessey voor vitamine A.

De berekening wordt uitgevoerd volgens de formule:

X = 637 × (Е328 (1) - Е328 (2)),

Waar X het vitamine A-gehalte is, μg / dL; 637 is de coëfficiënt berekend door Bessey voor de bepaling van vitamine A; Е328 (1) - de optische dichtheid van de oplossing vóór de bestraling; E328 (2) is de optische dichtheid van de oplossing na bestraling.

De coëfficiënt voor het overbrengen van de vitamine A-concentratie van μg / dL in μmol / l is 0,035.

Het gehalte aan carotenoïden wordt berekend met de formule:

X = 480-Е480,

Waar X het gehalte aan carotenoïden is, μg / dL; 480 is de coëfficiënt berekend door Bessey om carotenoïden te bepalen; E480 is de optische dichtheid van de testoplossing.

Opmerking

Volgens Bessey kunnen tijdens de onderzoeken grotere of kleinere serumvolumes worden ingenomen, maar de verhouding ervan tot het volume van de alcoholoplossing moet constant zijn bij elke verandering in het volume (de hoeveelheid) van het xyleen-octaanmengsel.

De norm voor het gehalte aan vitamine A in het bloedserum is: bij pasgeborenen en zuigelingen - 160-270 μg / l; bij volwassenen, 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Het gehalte aan carotenoïden in het volwassen serum is 800-2300 μg / l.