Diagnose van herpes

Diagnose van herpes is gebaseerd op het verloop van de klassieke virale verspreiding in gevoelige celkweken, immunofluorescentie en serologische werkwijzen uitvoeren colposcopisch studies met behulp van moderne moleculair-biologische methoden (PCR, dot-hybridisatie), waarmee u alle herpesvirusgroep diagnose, zoals HHV-6 en HHV-7 types.

Methoden voor laboratoriumdiagnostiek van herpesinfectie

De belangrijkste methoden zijn gericht op het afscheiden van HSV of het detecteren van virale deeltjes en / of hun componenten	Hulpmethoden gericht op het detecteren van antilichamen tegen HSV in biologische vloeistoffen van het menselijk lichaam
Isolatie van HSV in gevoelige culturen van cellen en dieren Directe en immunologische elektronenmicroscopie Directe en indirecte MFA-opties IFA Moleculair biologische methoden Latex agglutinatiereactie	Neutralisatiereactie RSK Bepaling van antilichamen tegen niet-structurele eiwitten van HSV-1,2

Het is aangetoond dat 76% van de patiënten genitale herpes (GH) heeft veroorzaakt door HSV-2 en in 24% - HSV-1-type. En GG als mono-infectie trad alleen op bij 22% van de patiënten, in 78% van de gevallen werden microbiële associaties gedetecteerd. Bij 46% van de patiënten werd parasitocenose veroorzaakt door twee pathogenen gedetecteerd, waaronder chlamydia in 40% van de gevallen. Minder vaak in de uitstrijkjes bepaald gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

Bij 27% van de patiënten werd parasitocenose vertegenwoordigd door drie en 5,2% met vier pathogenen. En vaker was er een combinatie van chlamydia met Gardnerella en Candida-schimmels. Deze gegevens rechtvaardigen de noodzaak van een grondige bacteriologisch onderzoek van de patiënten YY naar de ziekteverwekker combinaties te identificeren, evenals in diepgaande studie van de pathogenese van gemengde infecties van het urogenitale kanaal, die het mogelijk maken voor een gedifferentieerd complex behandeling van HSV-infectie.

Te bestuderen materialen bij de isolatie van HSV, afhankelijk van de lokalisatie van herpesletsels

Lokalisatie van laesies	Inhoud van blaasjes	Celschrapen				SMZ	Aspireren van de bronchiën	Biopt	Bloed
		1	2	3	4
Leer	+								+
Ogen			+						+
Geslachtsdelen				+					+
Anus	+				+				+
Mond	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Longen		+					+		+
De lever								+	+
Congenitale herpes	+	+	+				+		+

Methoden voor laboratoriumdiagnostiek van cytomegalovirusinfectie

Methoden	Tijd die nodig is om resultaten te krijgen	Aantekeningen
Virologische
Elektronenmicroscopie	3 uur	Malodostupen
Isolatie van het virus in celcultuur (CPD)	4-20 dagen	Standaard, langzaam
Immunofluorescentiekleuring van vroege AH met monoklonale antilichamen	6 uur	Minder specifiek
TSITOLOGICHESKIY	2-3 uur	Minder specifiek
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 dagen	Standaard
Ssubsistence	1 dag	Tijdrovend
RIF	6 uur	Eenvoudig, specifiek
NRIF	6 uur	Complex
RIMF	6 uur	Complex
IFA (IgM, TO)	6 uur	Snel, eenvoudig
Immunoblot	6 uur	Duur
Moleculair biologische
MG	5-7 dagen	Duur, tijdrovend
PCR	3 uur	Duur

Methoden voor de diagnose van het herpes zoster-virus

Diagnostische methoden	Laboratorium methoden
INDIRECTE
Toewijzing	Weefselcultuur, kippenembryo's, laboratoriumdieren, co-cultivatie met toegestane cellen of hulpvirussen
Identificatie van isolaten	Neutralisatiereactie, DSC, IF, IPPE, reactie van precipitaatisolaten, agglutinatie, IF
STRAIGHT
Cytology	Uitstrijkjes: kleur immunofluorescentie
Histologie	Pathomorfologie van de cel
Structuur	Embryonale microscopie, immuno-elektronische microscopie
Bepaling van antigenen	IF, PIÉF, RIM, IFA
Bepaling van de lokale productie van antilichamen	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Moleculaire biologische benaderingen	Moleculaire hybridisatie, PCR

Laboratoriumdiagnose van infectie veroorzaakt door het herpes zoster-virus

Diagnostische problemen	Methoden	Verwachte resultaten
Acute primaire infectie	1	Detectie na 2 uur
	2	Het niveau van antilichamen groeit langzaam
	3	Aanwezig 3 dagen na infectie
Acute gereactiveerde infectie	1	Detectie van ULV in 2 uur
	2	Het niveau van antilichamen groeit langzaam
	4	Aanwezig 4 dagen na het verschijnen van huiduitslag

1. de bepaling in de vloeistof van blaasjes van WIEF;
2. serologie: DSC, ELISA, gericht op identificatie
3. serologie: ELISA, gericht op het detecteren van IgM;
4. serologie: ELISA, gericht op het detecteren van IgA, IgM.

Methoden voor het aangeven van de immuunrespons van een infectie ten gevolge van het herpes zoster-virus

Benaderen	Werkwijze
Detectie van verhoogde antilichaamtiter in de tweede sera	RSK, RTGA, RPGA, neutralisatiereactie IF, RIM, ELISA
Detectie van Ig G, Ig A-klassespecifieke antilichamen in het eerste serummonster	IFA, IF, RIM, latexagglutinatie

Interpretatie van de resultaten van serologisch onderzoek van sera van de patiënt op herpesvirusinfecties (ELISA)

Naam van infectie / marker	Gemiddelde drempels voor infecties
	Analyse resultaten	Interpretatie
Cytomegalie Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positief 1-6 Positief 6-10 Positief> 10 Negatief Positief 100-300 Negatief <90 Twijfelachtig 90-100	Remissie Verergering van de ziekte Acute fase van de ziekte Geen infectie (ziekte) Acute fase van de ziekte Herhaal de analyse na 2-3 weken
Herpes eenvoudige 1,2 serotypen Anti-HSV 1/2 totaal. (100-900%)	Positief 100-400 Positief 400-800 Positief> 800 Negatief <100	Remissie Verergering van de ziekte Acute fase van de ziekte Geen infectie (ziekte)

De tabel presenteert de belangrijkste methoden voor laboratoriumdiagnostiek van herpesvirusinfecties en beveelt ook biologische materialen aan die worden bestudeerd bij het isoleren van HSV, rekening houdend met de lokalisatie van herpesletsels

Betrouwbaar is de toewijzing van herpes simplex en CMV door de infectie van gevoelige celculturen. Dus, in virologisch onderzoek van 26 patiënten in de periode van terugval, werd HSV geïsoleerd in een gevoelige Vero-celkweek in 23 gevallen (88,4%). In geïnfecteerde culturen werd een patroon van cytopathische werking karakteristiek voor HSV waargenomen - de vorming van meerkernige reuzencellen of de accumulatie van afgeronde en vergrote cellen in de vorm van trossen. In 52,1% van de gevallen was het mogelijk om foci van het cytopathische effect van het virus 16-24 uur na infectie te detecteren. Door 48-72 uur incubatie van geïnfecteerde kweken nam het percentage materialen dat specifieke celvernietiging veroorzaakt toe tot 87%. En slechts in 13% van de gevallen werden positieve resultaten gedetecteerd 96 uur na infectie en meer of met herhaalde passage.

Methoden voor laboratoriumdiagnostiek van gegeneraliseerde herpesinfectie

De belangrijkste methoden waren gericht op de detectie (isolatie) van herpesvirussen, hun deeltjes en hun componenten	Hulpmethoden gericht op het detecteren van antilichamen tegen herpesvirussen in biologische vloeistoffen, waarbij enzymatische verschuivingen in bloedserum worden gedetecteerd
Isolatie van Herpes virus op gevoelige celculturen en dierlijke Direct en immune elektronenmicroscopie directe en indirecte immunoperoxidase werkwijze uitvoeringsvormen directe en indirecte fluorescentie-antilichaamtechniek keuze opties ELISA Uitvoeringsvormen van moleculaire (DNA-DNA) hybridiserende Polymerase Chain Reaction Reaction latexagglutinatie	Neutralisatie reactie complement fixatie reactiemengsel latexagglutinatie indirecte fluorescerende antilichaammethode uitvoeringsvorm indirecte immunoperoxidase werkwijze variant Uitvoeringsvormen ELISA methode immunologische blotting radiale fixatie van complement Werkwijze Bepaling van alanine en aspartaat niveaus

Voor de diagnose van infectieuze mononucleosis (infectie veroorzaakt door VEB) worden serologische methoden gebruikt. De reactie van Paul Bunnel met erytrocyten van een ram, een diagnostische titer van 1:28 en hoger met een enkele studie van serum, of een 4-voudige toename van antilichamen bij het onderzoek van gepaarde sera. Gebruik de Goff-Bauer-reactie met een suspensie van 4% geformaliseerde rode bloedcellen van het paard. Het resultaat wordt na 2 minuten in aanmerking genomen, bij infectieuze mononucleosis is de reactie zeer specifiek.

Momenteel wordt een enzymimmunoassay (ELISA) ontwikkeld om infectieuze mononucleosis te diagnosticeren. In dit geval worden IgG- en IgM-antilichamen in het serum van de patiënt bepaald door het te incuberen met lymfoblasten die zijn geïnfecteerd met EBV, gevolgd door behandeling met fluorescerende antilichamen. In de acute periode van de ziekte worden antilichamen tegen het virale capside-antigeen bepaald in een titer van 1: 160 en hoger.

Bij gebruik van een aantal ingevoerde commerciële testsystemen IFA kan identificeren: antilichamen tegen ant Egan EBV-envelop antilichamen vroege antigeen van EBV, de totale antilichaam aan een vroege antigeen van EBV, bepaald in de acute fase van de ziekte en in de kern als in het cytoplasma en de beperkte antistof EBV vroege bepaald in de acute fase van de ziekte en in de kern als in het cytoplasma van cellen, gebonden antilichamen tegen EBV vroege antigeen bepaald in het midden van de ziekte alleen in het cytoplasma van cellen en antilichamen tegen EBV nucleair antigeen. Het gebruik van deze testsystemen maakt differentiële diagnose van een aantal ziekten geassocieerd met EBV mogelijk.

P23, P54, P72 (de aanwezigheid van het eiwit suggereert de mogelijkheid van reproductie EBV), blz 138. Said: na positieve ELISA om de antilichamen EBV geven immunoblot bevestiging responsie, waarbij de aanwezigheid van antilichamen tegen EBV marker proteïnen (p-eiwitten) geïsoleerde kunnen opsporen bovenstaande laboratoriummethoden worden gebruikt om de effectiviteit van de behandeling te beheersen.

De gevoeligheid van de virologische methoden is 85-100%, de specificiteit is 100%, de studietijd is 2-5 dagen. In de praktijk wordt vaak de methode van directe immunofluorescentie (PIF) met polyklonale of monoklonale antilichamen tegen HSV-1 en HSV-2 gebruikt. De UIF-methode kan eenvoudig worden gereproduceerd in een conventioneel klinisch laboratorium, het is niet duur, de gevoeligheid is hoger dan 80%, de specificiteit is 90-95%. Door immunofluorescentie microscopie onthulde de aanwezigheid van cytoplasmatische inclusies, morfologische kenmerken is het percentage geïnfecteerde cellen in de uitstrijkjes, schraapt urethra, baarmoederhals, cervix, rectum.

De UIF-methode geeft een idee van de morfologische eigenschappen van cellen en veranderingen in de lokalisatie van HSV-antigenen. Naast directe tekenen van celschade door herpesvirussen (detectie van specifieke luminescentie), zijn er indirecte tekenen van herpesinfectie volgens de UIF-gegevens:

• aggregatie van nucleaire materie, exfoliatie van karyoolma;
• aanwezigheid van de zogenaamde. Kernen "gaten", wanneer er slechts één karyolemma overblijft uit de kern van de cel;
• de aanwezigheid van intranucleaire insluitsels - Caudry's kalf.

Bij het instellen van de UIF arts ontvangt niet alleen kwaliteit, maar ook een kwantitatieve beoordeling van de geïnfecteerde cellen die we hebben gebruikt om de effectiviteit van antivirale therapie met acyclovir (AC) te evalueren. Zo werden 80 patiënten met eenvoudige genitale herpes (GG) in de dynamiek door de UIF-methode onderzocht. Het is aangetoond dat als vóór de behandeling met acyclovir in uitstrijkjes 88% van de patiënten een hoog percentage geïnfecteerde cellen (50-75% en hoger), na verloop van acyclovir in uitstrijkjes 44% van de patiënten met gezonde cellen gedetecteerd in 31% van de gevallen aangeduid individuele geïnfecteerde cellen en 25% van de patiënten had tot 10% van de geïnfecteerde cellen.

Het gehalte aan geïnfecteerde cellen in uitstrijkjes (PIF-reactie) van patiënten met genitale herpes, behandeld met aciclovir

Ziekteperioden	Percentage in uitstrijkjes
	Geïnfecteerde cellen					Normale cellen
	Meer dan 75%	50-75%	40-50%	10%	Enkele cellen in n / sp
Terugval (vóór behandeling)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remissie (na behandeling)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Met behulp van vele jaren UIF en de methode van dot-hybridisatie viel bijna 100% van de gevallen samen met de resultaten van het onderzoek. Opgemerkt moet worden dat, om de betrouwbaarheid van de diagnose van de GH, met name in gevallen waar sprake is van subklinische en malomanifestnyh vormen van herpes te verhogen, is het raadzaam om de 2-3 methode van laboratoriumdiagnostiek gebruiken, met name bij de behandeling van zwangere vrouwen, vrouwen met obstetrische geschiedenis benadeeld, mensen met een niet-gespecificeerde gynaecologische diagnose.

Dus, bij PCR-diagnose van virale bacteriële infecties van het urogenitale kanaal, is het noodzakelijk om de verkregen positieve resultaten te evalueren, rekening houdend met anamnese, de aanwezigheid (of afwezigheid) van specifieke klinische symptomen van de ziekte. Als chlamydia wordt gedetecteerd met PCR, dan is het in dit geval mogelijk om te praten over infectie en dienovereenkomstig de problemen van de therapie op te lossen. In het geval van detectie van mycoplasma's (ureumplasmas), die opportunistische micro-organismen zijn, zijn aanvullende kweekstudies vereist om de diagnose te bevestigen, dat wil zeggen het zaaien van het materiaal van de patiënt in gevoelige celculturen. Alleen als er positieve resultaten worden behaald in de cultuuranalyse, kunnen we spreken over laboratoriumbevestiging van de diagnose van mycoplasmose. Dezelfde methode maakt het mogelijk om, indien nodig, de gevoeligheid van de geïsoleerde mycoplasma's voor veelgebruikte medicinale vormen (antibiotica, fluoroquinolonen, enz.) Te bepalen.

Misschien een infectie in één stap met verschillende virussen van de familie Nepresviridae. Vaak ontdekten we een infectie van één patiënt met HSV-1, HSV-2 en CMV-virussen. Veel vaker geïnfecteerd met verschillende herpesvirussen waren patiënten met klinische en laboratoriumuitingen van secundaire IDS (patiënten met oncohematologische, oncologische, HIV-infectie). Zo wordt aangetoond dat klinische en immunologische aandoeningen die vordert met HIV-infectie gepaard gaan met een toename van het aantal herpesvirussen dat wordt gedetecteerd door moleculaire hybridisatie. In dit prognostisch meest significante kan worden beschouwd als een complexe one-stage detectie van DNA van HSV-1, CMV en HHV-6 type.

[1], [2], [3]