Hepatitis A-virus

Virale hepatitis A is een menselijke infectieziekte die wordt gekenmerkt door een overheersende leverbeschadiging en zich manifesteert klinische intoxicatie en geelzucht. Hepatitis A virus werd ontdekt in 1973 door S. Feynstonom toepassing van de werkwijze van immuun elektronenmicroscopie en door het infecteren apen (et al.) - chimpansees en zijdeaapjes. De essentie van de methode van immuun-elektronenmicroscopie is dat specifieke antilichamen (serum van herstellende) worden toegevoegd aan het filtraat van de ontlasting van de patiënt met hepatitis A en het neerslag wordt onderworpen aan elektronenmicroscopie. Vanwege de interactie van virussen met specifieke antilichamen ondergaan ze specifieke aggregatie. In dit geval zijn ze gemakkelijker te detecteren en aggregatie onder invloed van antilichamen bevestigt de specificiteit van het pathogeen. De ontdekking van S. Feinstone werd bevestigd in experimenten met vrijwilligers.

Hepatitis A-virus heeft een bolvorm, de diameter van het virion is 27 nm. Het genoom wordt voorgesteld door een enkelstrengig positief RNA met een massa van 2,6 MD. Supercapsid is afwezig. Het symmetrietype is kubisch - icosaëder. Het capside heeft 32 capsomeren, het wordt gevormd door vier polypeptiden (VP1-VP4). Door zijn eigenschappen behoort het hepatitis A-virus tot het geslacht Heparnovirus, de familie Picornaviridae. Antigene, hepatitis A-virus (HAV - hepatitis A-virus) is homogeen. HAV vermenigvuldigt zich goed in het lichaam van chimpansees, bavianen, hamadryls en gokapen (zijdeaapjes). Het virus kon lange tijd niet cultiveren. Alleen in de jaren tachtig. Het was mogelijk om celkweken te verkrijgen waarin HAV zich voortplant. Aanvankelijk werden voor deze doeleinden getransplanteerde nierlijnen van de rhesusaapnier (kweek FRhK-4) gebruikt en nu - de getransplanteerde lijn van niercellen van groene apen (kweek 4647).

Volgens de aanbevelingen van deskundigen van de WHO is de volgende nomenclatuur van markers van het hepatitis A-virus aangenomen: hepatitis-A-virus-NAU-antilichamen tegen hepatitis A-virus: anti-NAV IgM en anti-NAV IgG.

HAV is kleine deeltjes met een diameter van 27 - 30 nm, met icosahedrale symmetrie en met homogeniteit. Op het elektronendiffractiepatroon verkregen door de werkwijze van immuunaggregatie, worden elektronendichte deeltjes met oppervlakkig gelegen symmetrisch opgestelde capsomeren gedetecteerd. Met negatief contrast worden zowel volledige als lege deeltjes in de preparaten gedetecteerd. Nucleocapsid NAV, in tegenstelling tot die van influenza, heeft geen uitsteeksels en membranen aan het oppervlak. Het is ook belangrijk dat het virion HAV geen hartvormige structuur heeft.

Volgens haar fysisch-chemische eigenschappen van het hepatitis A-virus is verwant aan de familie van Picornaviridae, geslacht Enterovirus met atoomnummer 72. Echter, deze taxonomie was te ongewoon, en die vond het mogelijk om de terminologie "hepatitis A virus" te verlaten.

Zoals alle virussen van de familie Picornaviridae, bevat het hepatitis A-virus ribonucleïnezuur. Sommige laboratoria hebben de mogelijkheid aangetoond van het klonen van het genoom van het hepatitis A-virus, wat het vooruitzicht op het verkrijgen van vaccinpreparaten opent.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Resistentie van het hepatitis A-virus

Het virus is relatief resistent tegen hoge temperaturen, zuren, vetoplosmiddelen (er zijn geen lipiden), ontsmettingsmiddelen, het verdraagt een put met lage temperatuur. Dit alles draagt bij tot het behoud op de lange termijn in de externe omgeving. Bij kamertemperatuur, het overleeft enkele weken, bij 60 ° C verliest het gedeeltelijk de infectiviteit na 4-12 uur, volledig - na een paar minuten bij 85 ° C. Zeer goed bestand tegen chloor, waardoor het door de barrières van waterbehandelingsinstallaties in het leidingwater kan dringen.

Als we alle gegevens samenvatten, kunnen we het hepatitis A-virus als volgt karakteriseren:

• de natuurlijke meester is de mens;
• proefdieren - marmozet, chimpansee;
• bron van infectie - uitwerpselen;
• ziekte - epidemisch en endemisch;
• de transmissieroute is fecaal-oraal;
• incubatieperiode - 14-40 dagen;
• overgang naar chronische hepatitis - niet opgemerkt.

Immunologische eigenschappen van NAV zijn als volgt:

• Prototype-stammen - MS-1, CR-326, GVG. Alle zijn immunologisch vergelijkbaar of identiek;
• Antilichamen - IgM en IgG, worden geproduceerd als reactie op de introductie van structurele eiwitten van het virus en zijn beschermend;
• I De trofische werking van menselijk serum-y-globuline - beschermt of verzwakt de ziekte onder de toestand van toediening voorafgaand aan infectie of tijdens de incubatieperiode.

Fysisch-chemische kenmerken van NAU zijn als volgt:

• Morfologie is een niet-omhullend bolvormig deeltje met kubische symmetrie, het capside bestaat uit 32 capsomeren;
• De diameter is 27-30 nm;
• De dichtheid in CsCl (g / cm3) is 1,38-1,46 (open deeltjes), 1,33-1,34 (rijp virion), 1,29-1,31 (onrijpe virionen, lege deeltjes);
• De sedimentatiecoëfficiënt is 156-160 rijpe virionen;
• Nucleïnezuur - enkelstrengs, lineair RNA;
• Relatief molecuulgewicht - 2,25 106-2,8 106KD;
• Het aantal nucleotiden is 6.500-8.100.

De stabiliteit van NAV in fysisch-chemische effecten is als volgt:

• Chloroform, ether - is stabiel;
• Chloor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 minuten - gedeeltelijke inactivatie;
• Chloramine, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - volledige inactivatie;
• Formaline, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 uur - volledige inactivatie, 1: 350, 20 ° С, 60 min - gedeeltelijke inactivatie.

Temperatuur:

• 20-70 ° C - stabiel;
• 56 ° С, 30 minuten - het is stabiel;
• 60 ° С, 12 uur - gedeeltelijke inactivatie;
• 85 ° С, 1 min - volledige inactivatie;
• Autoclaveren, 120 ° C. 20 minuten - volledige inactivatie;
• Droge hitte, 180 ° C, 1 uur - volledige inactivatie;
• UV, 1,1 W, 1 min - voltooi inactivatie.

De gepresenteerde gegevens laten zien dat de fysisch-chemische eigenschappen van het hepatitis A-virus het dichtst bij enterovirussen liggen. Net als andere enterovirussen is HAV resistent tegen vele desinfecterende oplossingen, volledig gedeactiveerd gedurende enkele minuten bij 85 ° C en geautoclaveerd.

Het is bewezen dat het hepatitis A-virus kan worden gereproduceerd in primaire en getransplanteerde monolaagkweeklijnen van menselijke en aapcellen. Vooral actieve reproductie van hepatitis A-virus in kweken in vitro wordt waargenomen wanneer lever-extracten van apenpatiënten als uitgangsmateriaal worden gebruikt. Er moet worden opgemerkt dat bij alle experimenten volgens een reproductie van hepatitis A virus in in vitro kweken opmerkelijk lange incubatieperiode primaire doorgangen (-10 tot 4 weken), daarna accumulatie van viraal genetisch materiaal toeneemt, maar de absolute waarden zeer onbeduidend, wat voor veel onderzoekers reden geeft om te praten over onvolledige replicatie van het hepatitis A-virus in weefselculturen.

Als we de literatuurgegevens over de reproductie van hepatitis A-virus uit niet-wortelculturen samenvatten, kan worden gesteld dat het feit van een langdurige ervaring met HAV in vitro onbetwistbaar is. Optimale omstandigheden voor een stabiel hoog niveau van virale replicatie zijn nog niet definitief vastgesteld, en dit beperkt de studie van de biologische eigenschappen ervan, de productie van een bron van reagentia voor de productie van diagnostica en het ontwerp van vaccins.

Tegelijkertijd zijn er meer optimistische oordelen over dit probleem in de literatuur te vinden. De oplossing van alle problemen in verband met de teelt van het hepatitis A-virus is een zaak voor de nabije toekomst. Bij het bestuderen van de optimale omstandigheden HAV propagatie in celkweek embryonische nier rhesusapen onthulde twee fasen: de fase van infectieuze virusproductie (maximaal 6-8 dagen bij de 5de passage) en de fase van intensieve accumulatie van viraal antigeen. Er wordt ook aangetoond dat de meest significante accumulatie van het virale antigeen optreedt onder de omstandigheden van zogenaamde roller-cultivatie (roterende flessen). Op deze manier ontstaan grote mogelijkheden om een cultureel antigeen in grote hoeveelheden te verkrijgen, en bijgevolg zal een uitgangsmateriaal voor de bereiding van diagnostische systemen en de vervaardiging van vaccinpreparaten verschijnen.

Epidemiologie van hepatitis A

Hepatitis A-virus heeft een hoge pathogeniciteit voor mensen. Volgens de conclusie van de WHO (1987) is het voor het begin van de ziekte voldoende om slechts één virion te infecteren. De praktische besmettelijke dosis is echter waarschijnlijk veel hoger. De infectiebron is alleen een geïnfecteerde persoon. Het virus komt in grote hoeveelheden vrij met uitwerpselen 12-14 dagen vóór de verschijning van geelzucht en binnen 3 weken. Icteric periode. Significante verschillen in de isolatie van de ziekteverwekker bij patiënten met icterica, geelzucht en asymptomatische vormen van hepatitis A zijn niet geïdentificeerd. De methode van infectie is fecaal-oraal, voornamelijk waterig, en ook door huishouden- en voedselroutes. De methode van infectie is fecaal-oraal, voornamelijk waterig, en ook door huishouden- en voedselroutes. De belangrijkste (primaire) toedieningswijze van het virus is water. Het is ook mogelijk om infecties via de lucht te verspreiden. De vatbaarheid van de bevolking is universeel. Meestal zijn kinderen jonger dan 14 jaar ziek. De ziekte heeft een uitgesproken seizoensinvloeden in de herfst en winter.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Symptomen van hepatitis A

De incubatietijd varieert van 15 tot 50 dagen, afhankelijk van de hoeveelheid infectiedosis van het virus, maar gemiddeld is dit 28-30 dagen. Eenmaal in het lichaam, hepatitis A virus repliceert in de regionale lymfeknopen in het bloed en vervolgens levercellen en veroorzaakt diffuse acute hepatitis die gepaard gaat met laesies van de lever hepatocyten en reticulo cellen en een daling van de ontgifting en barrièrefunctie. Schade aan hepatocyten treedt niet op vanwege de directe werking van het virus, maar als een gevolg van immunopathologische mechanismen. Het meest typische beeld van hepatitis A is de acute icterische cyclische vorm: incubatietijd, prodromaal (vroegrijp), icterische periode en herstel. In de foci van infectie laat een groot aantal patiënten met asymptomatische en anicteric vormen van infecties, het aantal waarvan overheerst icterisch ( "ijsbergfenomeen").

Post-infectieuze immuniteit is sterk en langdurig, veroorzaakt door virale neutraliserende antilichamen en immuungeheugencellen.

Microbiologische diagnose van hepatitis A

Diagnose van hepatitis A (behalve infecties dieren - chimpansees marmozet, bavianen, die wij hebben) op basis van verschillende immunologische methoden: DGC immunofluorescentiemethode, hemagglutinatie immune adhesie (complex van virusantigeen + antilichaam in aanwezigheid van complement geadsorbeerd op erytrocyten en veroorzaakt hechting) . De toepasbaarheid van deze werkwijzen beperkt door het ontbreken van specifieke virale antigenen en immunofluorescentie reactie vereist leverbiopsie, hetgeen ongewenst is. Betrouwbaar en specifiek is de methode van immuun-elektronenmicroscopie, maar het is zeer arbeidsintensief. Daarom, totdat de enige aanvaardbare methode voor de immunologische reactie immunosorbent assay vaste fase in de vorm van IPM of RIM, vooral bij de modificatie van de "capture" van immunoglobuline M. In ons land hiervoor voorgestelde doel testsysteem - "DIAG-A-GEO". Het werkingsprincipe van dit testsysteem is als volgt. Op de wanden van polystyreen lunochek gesorbeerde eerste antilichamen tegen immunoglobulinen van klasse M (antiimmunoglobuliny M) toegevoegd aan de onderzochte patiënt serum. Als er antilichaamklasse IgM, zullen zij een antilichaam-Ti-M te binden, vervolgens aan een bepaald viraal antigeen (hepatitis A-virus), dat wordt verkregen door het groeien in celkweek. Het systeem wordt gespoeld, en daaraan toegevoegd antivirale antilichamen gemerkt met mierikswortel peroxidase. Als alle vier de componenten van het systeem samenwerken, ontstaat een "sandwich" met vier lagen:

• anti-immunoglobulinen M,
• immunoglobulinen M (tegen hepatitis A-virus - in het testserum van de patiënt),
• viraal antigeen,
• antivirale antilichamen gemerkt met een enzym.

Om dit complex te detecteren, wordt een substraat voor het enzym aan de lunetten toegevoegd. Onder invloed van het enzym wordt het vernietigd en wordt een gekleurd product gevormd. De intensiteit van de kleur kan kwantitatief worden gemeten met een spectrofotometer of fotocolorimeter.

Het voordeel van de methode van "capture" van IgM is dat antilichamen van deze klasse van immunoglobulines verschijnen bij de primaire immuunrespons en een actief stadium van infectie aangeven, ze verdwijnen na de overgedragen ziekte. Antivirale antilichamen behorend tot de klasse van IgG, daarentegen, blijven lang na de ziekte bestaan en verschaffen de verworven immuniteit. Voor de detectie van hepatitis A-virus is een DNA-sondemethode voorgesteld: een complementair vRNA wordt gebruikt als een DNA-probe.

Behandeling van hepatitis A

Vanwege het feit dat de interferonproductie verstoord is in virale hepatitis, is de behandeling van hepatitis A gebaseerd op het gebruik van interferon en inductor van de endogene synthese amixine.

Specifieke preventie van hepatitis A

Eerder schaal toegepast seroprevention hepatitis A, onder toepassing gammaglobuline niet gerechtvaardigd echter de nadruk op het bedrijf immunisatie geplaatst, gedragen vaccinatie tegen hepatitis A. Hiertoe worden verschillende varianten van vaccins ontwikkeld die al in gebruik zijn. In Rusland werd al in 1995 een effectief vaccin tegen hepatitis A verkregen en nu is het met succes toegepast.