Microbiologisch onderzoek van sputum

Microbiologisch onderzoek is de belangrijkste schakel in het diagnostisch zoeken naar en verifiëren van de verwekker van pneumonie. Het omvat niet alleen het isoleren van de verwekker, maar ook het bestuderen van de eigenschappen ervan, waaronder de gevoeligheid voor verschillende medicijnen met bactericide en bacteriostatische werking.

Hiervoor wordt de methode van sputumbemesting op verschillende voedingsmedia gebruikt. In een sputummonster dat naar het laboratorium wordt gestuurd, worden purulente klonten geselecteerd en zorgvuldig gewassen in een petrischaal met een isotopische oplossing van natriumchloride, waardoor ze tot op zekere hoogte worden bevrijd van de microflora van de bovenste luchtwegen. De bemesting van purulente sputumklonten vindt plaats op verschillende voedingsmedia, waarvan de samenstelling wordt beschreven in speciale handleidingen over microbiologie. De media met de bemesting worden 24 uur geïncubeerd bij 37,5 °C. Uit de gekweekte kolonies worden zuivere culturen geïsoleerd, deze worden geïdentificeerd met behulp van bekende microbiologische methoden en hun gevoeligheid voor antibiotica wordt bepaald.

Om het kwantitatieve gehalte aan micro-organismen te bepalen, wordt het sputum gehomogeniseerd, gemengd met voedingsbouillon, en worden opeenvolgende tienvoudige verdunningen van het mengsel bereid. Deze worden geënt op petrischalen met bloedagar. Na 24 uur incubatie bij 37,5 °C worden de resultaten verwerkt. Kolonies van hetzelfde type worden geteld en de verdunningsgraad van het materiaal wordt in aanmerking genomen. Van de kolonies worden uitstrijkjes gemaakt en onder de microscoop onderzocht.

Interpretatie van de resultaten

De interpretatie van de resultaten van microbiologisch onderzoek van sputum is vrij complex, wat te wijten is aan een aantal factoren. Hierboven is al gewezen op de constante aanwezigheid van de microflora van de bovenste luchtwegen en de mondholte in de bronchiale inhoud en de frequente aanwezigheid van de meeste typische verwekkers van luchtwegaandoeningen (pneumokokken, streptokokken, stafylokokken, enz.) in de normale tracheobronchiale inhoud van gezonde mensen. De isolatie van verschillende micro-organismen in sputum tijdens microbiologisch onderzoek, waarvan de meeste in dit specifieke geval opportunistisch zijn, maakt het in dit opzicht uiterst moeilijk om de verwekker van de ziekte vast te stellen. Daarom is het bij de interpretatie van de resultaten van microbiologisch onderzoek van sputum noodzakelijk om rekening te houden met de kwantitatieve overheersing van een bepaald type bacterie (meer dan 106-107 ^mc/ ml), het verschijnen van bepaalde micro-organismen in de exacerbatiefase en hun verdwijning tijdens de remissieperiode. Het is erg belangrijk om rekening te houden met het klinische beeld van de ziekte.

De belangrijkste en mogelijke veroorzakers van verschillende klinische vormen van longontsteking

Klinische vorm van longontsteking	Belangrijkste ziekteverwekkers	Mogelijke ziekteverwekkers
Croupous	Pneumokokken	Streptokokken, Klebsiella
Post-influenza	Stafylokokken, pneumokokken, klebsiella	Haemophilus influenzae, streptokokken
Abcesvorming	Stafylokokken, bacteroïden, gemengde flora	Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa
Aspiratie	Bacteroides, anaërobe streptokokken	Stafylokokken, pneumokokken
Postoperatief	Stafylokokken	Pneumokokken, Klebsiella
Tussenliggend	Mycoplasma's	Pathogenen van ornithose, psittacose
Secundaire pneumonie bij ziekenhuispatiënten zonder eerdere antibacteriële therapie	Stafylokokken, pneumokokken, klebsiella, bacteroides	Escherichia coli, serratia, enz.
Secundaire longontsteking ontwikkeld tegen de achtergrond van antibacteriële therapie	Facultatieve pathogene micro-organismen	Pseudomonas, Serratia, Klebsiella, Staphylococcus, Proteus, enz.
Bij patiënten met chronische bronchitis	Pneumokokken, Haemophilus influenzae	Stafylokokken, streptokokken
Bij patiënten met alcoholisme	Pneumokokken, Haemophilus influenzae, Klebsiella	E. coli, protozoa
Bij verworven immunodeficiëntiesyndroom	Pneumocystis, schimmels	Cytomegalovirussen
Bij patiënten wier zorg door derden wordt verleend	Pneumokokken, stafylokokken, hemofiele papillen	Klebsiella, Escherichia coli

Bij de kwantitatieve beoordeling van de resultaten van het onderzoek naar microbiële contaminatie bij patiënten met pneumonie is het belangrijk rekening te houden met de extreem hoge gevoeligheid van deze indicator voor het voorschrijven van antibiotica. Zelfs kortdurende behandeling met antibacteriële middelen kan leiden tot een sterke afname van microbiële contaminatie, waardoor een adequate beoordeling van de resultaten van het sputumonderzoek niet mogelijk is. Daarom is het raadzaam om sputum te verzamelen vóór het voorschrijven van een antibioticabehandeling.

Er moet ook worden opgemerkt dat speciale selectieve voedingsmedia worden gebruikt voor het kweken van intracellulaire pathogenen van pneumonie (mycoplasma, legionella, chlamydia, rickettsia). Routinematig microbiologisch onderzoek met conventionele voedingsmedia (agar-agar) levert nooit positieve resultaten op. Daarom moet de keuze van specifieke microbiologische testmethoden worden uitgevoerd in overleg met de behandelend arts, die verplicht is de laboratoriumarts te informeren over zijn vermoedens met betrekking tot de mogelijke rol van intracellulaire pathogenen bij het optreden van pneumonie bij deze patiënt.

Hierbij moet worden aangetekend dat zelfs een technisch perfect microbiologisch onderzoek van sputum in de praktijk in slechts 40-60% van de gevallen de ziekteverwekker kan identificeren. Daarom kunnen andere moderne onderzoeksmethoden worden gebruikt om de ziekteverwekker te verifiëren. De informatiewaarde van een bacteriologisch onderzoek kan aanzienlijk worden vergroot door tracheobronchiaal aspiraat, vloeistof verkregen tijdens bronchoalveolaire lavage (BAL), bronchoscopie, enz., te gebruiken als biologisch materiaal in plaats van sputum.

Daarnaast kunnen immunofluorescentie van diverse biologische materialen (bronchoscopiemateriaal, bloed, pleura-inhoud, enz.), PCR-diagnostische methoden en het bestuderen van de concentratie specifieke antilichamen in het bloedserum worden gebruikt om pneumonieverwekkers te identificeren. Helaas hebben deze diagnostische methoden nog geen brede klinische toepassing gevonden en worden ze momenteel alleen gebruikt in grote gespecialiseerde centra en laboratoria.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]