Microscopische analyse van sputum

Microscopische observatie van natief en vaste gekleurd sputum monsters kan een gedetailleerd onderzoek van de celstructuur, en een zekere mate weerspiegelt de aard van het pathologische proces in de longen en bronchiën, de activiteit, de verschillende vezelachtige en kristalvorming identificeren ook belangrijke diagnostische waarde, en tenslotte ongeveer beoordelen van de conditie microbiële flora van de luchtwegen (bacterioscopie).

Gebruik bij microscopie inheemse en geverfde preparaten van een sputum. De microbiële flora te bestuderen (uitstrijkje) sputum uitstrijkjes worden gewoonlijk gekleurd met Giemsa-Romanovsky, Gram, en voor de detectie van Mycobacterium tuberculosis maar Ziehl-Nielsen.

Cellulaire elementen en elastische vezels

Van de cellulaire elementen die kunnen worden gedetecteerd in het sputum van patiënten met pneumonie, zijn epitheliale cellen, alveolaire macrofagen, leukocyten en erythrocyten van diagnostisch belang.

Epitheliale cellen. Plaveiselepitheel heeft niet uit de mond, nasopharynx, de stemplooien en de epiglottis diagnostische waarde, hoewel de detectie van een groot aantal plaveiselcellen, geeft kenmerkend een lage kwaliteit sputummonster naar het laboratorium en speeksel die aanzienlijke verontreiniging.

Bij patiënten met pneumonie wordt sputum geschikt geacht voor onderzoek als, met een microscopie met een kleine toename, het aantal epitheliale cellen niet hoger is dan 10 in het gezichtsveld. Een groter aantal epitheelcellen wijst op een onaanvaardbare overheersing in het biologische monster van de inhoud van de orofarynx.

Alveolaire macrofagen, die in kleine hoeveelheden ook in elk sputum te vinden zijn, zijn grote cellen van reticulohystocytische oorsprong met een excentrisch gelegen grote kern en overvloedige insluitsels in het cytoplasma. Deze insluitsels kunnen bestaan uit door macrofagen geabsorbeerde kleine stofdeeltjes (stofcellen), leukocyten en dergelijke. Het aantal alveolaire macrofagen neemt toe met ontstekingsprocessen in het pulmonaire parenchym en de luchtwegen, inclusief pneumonie.

Cellen van cilindrisch ciliated epitheel die het slijmvlies van het strottenhoofd, de trachea en de bronchiën bekleden. Ze zien eruit als verlengde cellen, aan een uiteinde verbreed, waar de kern en cilia zich bevinden. Cellen cilindrische trilhaarepitheel gevonden in een sputum, maar de toename geeft schade bronchiale mucosa en de luchtpijp (acute en chronische bronchitis, bronchiëctasie, tracheïtis, laryngitis).

Leukocyten in kleine hoeveelheden (2-5 in het gezichtsveld) zijn te vinden in elk sputum. Bij ontsteking van het longweefsel of bronchiale slijmvlies en trachea, vooral bij suppuratie (gangreen, longabces, bronchiëctasie), is hun aantal aanzienlijk verhoogd.

Bij het kleuren van sputumpreparaten volgens Romanovsky-Giemsa is het mogelijk individuele leukocyten te differentiëren, wat soms een belangrijke diagnostische waarde heeft. Wanneer dus uitgedrukt longontsteking of bronchiaal slijmvlies weefsel toeneemt als het totale aantal neutrofielen en het aantal degeneratieve vormen van fragmentatie van kernen, en de vernietiging van het cytoplasma.

Een toename van het aantal degeneratieve vormen van leukocyten is het belangrijkste teken van de activiteit van het ontstekingsproces en het ernstiger verloop van de ziekte.

Erytrocyten. Enkele erytrocyten kunnen praktisch en elk sputum worden gedetecteerd. Een significante toename wordt waargenomen wanneer vasculaire permeabiliteit verminderd is bij patiënten met pneumonie, met vernietiging van long- of bronchiaal weefsel, stagnatie in een kleine circulatiecirkel, longinfarct, enz. In een groot aantal rode bloedcellen in sputum worden gevonden tijdens de bloedspuwing van elk ontstaan.

Elastische vezels. Nog een element van sputum plastic vezels die in sputum verschijnen wanneer vernietiging van longweefsel (longabces, tuberculose, desintegrerende longkanker, enz.) Ook genoemd moet worden. Elastische vezels worden gepresenteerd in sputum in de vorm van dunne twee-contour, gekroesde filamenten met dichotome verdeling aan de uiteinden. Het uiterlijk van elastische vezels in sputum bij patiënten met ernstige pneumonie wijst op het optreden van een van de complicaties van de ziekte - abcessen van longweefsel. In sommige gevallen, bij de vorming van longabces, kunnen elastische vezels in sputum zelfs iets eerder worden gedetecteerd dan de overeenkomstige radiografische veranderingen.

Vaak, met croupous pneumonia, tuberculose, actinomycosis, fibrineuze bronchitis in sputum preparaten, kunnen dunne fibrine vezels worden gedetecteerd.

Tekenen van een actief ontstekingsproces in de longen zijn:

1. de aard van sputum (mucopurulent of etterig);
2. een toename van het aantal neutrofielen in sputum, inclusief hun degeneratieve vormen;
3. een toename van het aantal alveolaire macrofagen (van enkele clusters van verschillende cellen in het gezichtsveld en meer);

Het uiterlijk in het sputum van elastische vezels duidt op de vernietiging van longweefsel en de vorming van longabces.

De uiteindelijke conclusies over de aanwezigheid en mate van activiteit van ontsteking en vernietiging van longweefsel worden alleen gevormd wanneer ze worden vergeleken met het klinische beeld van de ziekte en de resultaten van andere laboratorium- en instrumentele onderzoeksmethoden.

[1], [2], [3], [4], [5]

Microbiële flora

Smearmicroscopie, gekleurd volgens Gram, en de studie van microbiële flora (bacterioscopie) in een deel van de patiënten met longontsteking maakt het voorlopig mogelijk om het meest waarschijnlijke veroorzakende agens van longinfectie vast te stellen. Deze eenvoudige methode voor snelle diagnostiek van het pathogeen is niet nauwkeurig genoeg en mag alleen worden gebruikt in combinatie met andere (microbiologische, immunologische) methoden van sputumonderzoek. Immersiemicroscopie van gekleurde uitstrijkjes is soms erg handig voor noodselectie en toediening van adequate antibioticumtherapie. Men moet echter rekening houden met de mogelijkheid van besmetting van de bronchiale inhoud van de microflora van de bovenste luchtwegen en de mondholte, vooral als de sputumcollectie niet juist is.

Daarom wordt sputum alleen geschikt geacht voor verder onderzoek (bacterioscopie en microbiologisch onderzoek) als het aan de volgende voorwaarden voldoet:

• Gramkleuring in sputum onthult een groot aantal neutrofielen (meer dan 25 in het gezichtsveld met een kleine vergroting van de microscoop);
• Het aantal epitheliale cellen, meer karakteristiek voor de inhoud van de orofarynx, is niet groter dan 10;
• bij de bereiding is er een overheersing van micro-organismen van hetzelfde morfologische type.

. Op Gramkleuring van sputum in een uitstrijkje soms goed genoeg om gram pneumokokken, streptokokken, stafylokokken en Gram-negatieve bacteriën groep te identificeren - Klebsiellu, wand Pfeiffer, E. Coli en andere gram-positieve bacteriën in dit geval blauw geworden, en Gram - rood.

Bacteriële pathogenen van pneumonie

Grampositieve	Gram
Pneumococcus Streptococcus pneumoniae. Streptococcus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans. Stafylokok aureus, Stafylokokkenhemolyticus.	Klebsiella  (Klebsiella pneumoniae) Hemophilus influenzae (Pfeiffer) Haemophilius influenzae Pseudomonas aeruginosa  (Pseudomonas aeruginosa) Legionella (Legionella Pneumophilia) E. Coli (Escherichia coli)

Pre sputumvlek is de makkelijkste manier van longontsteking ziekteverwekker verificatie en heeft een duidelijke waarde voor de selectie van de optimale behandeling met antibiotica. Wanneer bijvoorbeeld het detecteren uitstrijkjes gekleurd met Gram, grompolozhitelnyh diplokokken (pneumokokken) of stafylokokken plaats van breedspectrumantibiotica, die de kans op selectie en vermeerdering van micro-organismen te verhogen aitibiotikorezistentnyh mogelijk de doelgerichte therapie, actief tegen stafylokokken of pneumokokken toewijzen. In andere gevallen kan de detectie van de dominante flora in de Gram uitstrijkjes pas die veroorzaakt longontsteking Enterobacteriaceae zijn gramnegatieve (Klebsiella, E. Coli, etc.), die een corresponderende bestemming doelgerichte therapie vereist geven.

Echter, de voorlopige conclusie van de waarschijnlijke veroorzaker van longinfecties microscopisch worden gedaan gebaseerd pas significante toename van bacteriën in sputum, in een concentratie van 10 ⁶ - 10 ⁷  microbiële cellen / ml of meer (LL Vishnjakova). Lage concentraties van micro-organismen (<10 ³  mks / ml) zijn kenmerkend voor de bijbehorende microflora. Indien de concentratie van microbiële cellen varieert van 10 ⁴  om 10 ⁶  microbiële cellen / ml, kan deze term de etiologische rol van dit micro-organisme in het voorkomen van pulmonaire infectie, maar niet bewijzen.

Men moet ook onthouden dat "atypische" intracellulaire pathogenen (mycoplasma,  legionella, chlamydia, rickettsia) Gramm niet bevlekken. In deze gevallen kan een vermoeden van een "atypische" infectie optreden als uitstrijkjes een dissociatie vertonen tussen een groot aantal neutrofielen en een extreem klein aantal microbiële cellen.

Helaas is de werkwijze gekenmerkt door microscopie en in het algemeen tamelijk lage sensitiviteit en specificiteit. Niet voorspellende waarde, zelfs tegen pneumokokken worden goed weergegeven nauwelijks bereikt 50%. Dit betekent dat de methode in de helft van de gevallen vals positieve resultaten oplevert. Dit heeft verschillende redenen, waaronder het feit dat ongeveer 1/3 van de patiënten voor opname zijn antibiotica, die de effectiviteit van sputumvlek vermindert ontvangen. Zelfs bij positieve resultaten van het onderzoek, hetgeen een voldoende hoge concentratie in het uitstrijkje "typische" bacteriële pathogenen (bijvoorbeeld pneumococcen), niet volledig de aanwezigheid van co-infectie "atypische" intracellulaire pathogenen (mycoplasma, Chlamydia, Legionella) sluiten.

De methode van bacterioscopie van sputum-uitstrijkjes, gekleurd door Gram, helpt in sommige gevallen om het veroorzakende agens van pneumonie te verifiëren, hoewel het in het algemeen een zeer lage voorspellende waarde heeft. Atypische intracellulaire pathogenen (mycoplasma, legionella, chlamydia, rickettsia) worden helemaal niet geverifieerd door de methode van bacterioscopie, omdat ze geen Gramm kleuren.

Er dient te worden gewezen op de mogelijkheid van microscopische diagnose bij patiënten met longontsteking van schimmelinfecties van de longen. Het meest relevant voor patiënten die langdurig worden behandeld met breedspectrumantibiotica is de detectie van Candida albicans-sputum in de vorm van gistachtige cellen en vertakt mycelium door microscopie van natieve of gekleurde sputumpreparaten. Ze duiden op een verandering in de microflora van de tracheobronchiale inhoud, die optreedt onder invloed van antibiotische behandeling, waarvoor een substantiële correctie van de therapie nodig is.

In sommige gevallen is het bij patiënten met longontsteking nodig om de bestaande longziekte te differentiëren met tuberculose. Voor dit doel, gebruik dan een kleur vlek Ziehl-Nielsen, die in sommige gevallen de identificatie van Mycobacterium tuberculosis mogelijk maakt, maar een negatief resultaat van een dergelijk onderzoek betekent niet dat een gebrek aan tbc-patiënten. Bij het kleuren van sputum volgens Tsil-Nielsen is mycobacterium tuberculosis rood gekleurd en zijn alle andere sputumelementen blauw. Tuberculeuze mycobacteriën hebben het uiterlijk van ontlasting, rechte of licht gekromde stokken van verschillende lengtes met afzonderlijke verdikkingen. Ze bevinden zich in de bereiding in groepen of afzonderlijk. Diagnostische waarde is de detectie bij de bereiding van zelfs enkele mycobacteria tuberculosis.

Gebruik een aantal aanvullende methoden om de effectiviteit van microscopische detectie van mycobacteria tuberculosis te vergroten. De meest voorkomende hiervan is de zogenaamde flotatiemethode, waarbij gehomogeniseerd sputum wordt geschud met tolueen, xyleen of benzine, waarvan de druppels opduiken en mycobacteriën vangen. Nadat het sputum is afgezet, wordt de bovenste laag op de dia gepipetteerd. Vervolgens wordt het medicijn gefixeerd en gekleurd door Tsilyu-Nielsen. Er zijn andere methoden van accumulatie (elektroforese) en microscopie van tuberculosebacteriën (luminescentiemicroscopie).

Microscopisch onderzoek (analyse) van sputum kan slijm, cellulaire elementen, fibreuze en kristallijne formaties, schimmels, bacteriën en parasieten detecteren.

cellen

• Alveolaire macrofagen zijn cellen van reticulogistocyt oorsprong. Een groot aantal macrofagen in sputum wordt gedetecteerd in chronische processen en in het stadium van het oplossen van acute processen in het bronchopulmonale systeem. Alveolaire macrofagen die hemosiderine bevatten ("cellen van hartafwijkingen") worden gedetecteerd met een mild infarct, bloeding, stagnatie in een kleine circulatiecirkel. Macrofagen met lipidedruppeltjes zijn een teken van obstructief proces in de bronchiën en de bronchiolen.
• Xantomcellen (vette macrofagen) worden gevonden in abces, actinomycose, echinococcose van de longen.
• Cellen van het cilindrische ciliated epitheel zijn cellen van het slijmvlies van het strottenhoofd, trachea en bronchi; ze worden gevonden in bronchitis, tracheitis, bronchiale astma, maligne gezwellen van de longen.
• Het platte epitheel wordt gedetecteerd wanneer speeksel het sputum binnendringt, het heeft geen diagnostische betekenis.
• Leukocyten in een of andere hoeveelheid zijn aanwezig in elk sputum. Een groot aantal neutrofielen wordt gedetecteerd in mucopurulent en etterend sputum. Eosinofielen zijn rijk aan sputum bij bronchiale astma, eosinofiele pneumonie, glottis-longlaesies en longinfarct. Eosinofielen kunnen in sputum verschijnen voor tuberculose en longkanker. Lymfocyten in grote aantallen worden gevonden in kinkhoest en, zeldzamer, met tuberculose.
• Erytrocyten. Detectie van enkele rode bloedcellen in sputum is niet van diagnostische betekenis. Als er vers bloed in het sputum aanwezig is, worden onveranderde erythrocyten bepaald, maar als het bloed dat zich lange tijd in de luchtwegen bevond, met sputum vertrok, dan werden uitgeloogde rode bloedcellen gevonden.
• Cellen van kwaadaardige tumoren worden gevonden in kwaadaardige neoplasma's.

vezels

• Elastische vezels verschijnen in het verval van longweefsel, wat gepaard gaat met de vernietiging van de epitheliale laag en het vrijkomen van elastische vezels; ze worden aangetroffen in tuberculose, abces, echinokokkose, neoplasma's in de longen.
• Coronale vezels worden gedetecteerd in chronische longziekten, zoals caverneuze tuberculose.
• Gecalcineerde elastische vezels zijn elastische vezels geïmpregneerd met calciumzouten. Detectie van hen in sputum is kenmerkend voor de afbraak van tuberculaire petrichitis.

Spiralen, kristallen

• Kurshman-spiralen worden gevormd in de spastische staat van de bronchiën en de aanwezigheid van slijm in hen. Tijdens een hoestdruk wordt visceus slijm vrijgemaakt in het lumen van een grotere bronchus, die in een spiraal draait. Kurshman-spiralen verschijnen met bronchiale astma, bronchitis, longtumoren, compressie van bronchiën.
• De Charcot-Leiden-kristallen zijn de producten van het verval van eosinofielen. Verschijnen meestal in een sputum dat eosinofielen bevat; zijn karakteristiek voor bronchiale astma, allergische aandoeningen, eosinofiele infiltraten in de longen, longblaasjes.
• Cholesterolkristallen verschijnen met abces, long echinococcosis, neoplasma's in de longen.
• Hematoidinekristallen zijn karakteristiek voor abces en gangreen van de long.
• Druppels van actinomyceten worden gedetecteerd in de actinomycose van de longen.
• Er verschijnen elementen van echinococcus met echinococcose van de longen.
• Kurkt Dietrich - brokken van een geelachtig grijze kleur, met een onaangename geur. Ze bestaan uit afval, bacteriën, vetzuren, vetdruppeltjes. Ze zijn typisch voor een abces van de long en bronchiëctasie.
• Ehrlich's tetrad bestaat uit vier elementen: calcified detritus, verkalkte elastische vezels, cholesterol kristallen en mycobacterium tuberculosis. Verschijnt in het verval van de verkalkte primaire tuberculaire focus.

Mycelium en ontluikende schimmelcellen verschijnen in schimmellaesies van het bronchopulmonale systeem.

Pneumocystis treedt op bij pneumocystis pneumonie.

Spherules van schimmels worden gedetecteerd in coccidioidomycose van de longen.

De ascaride larven worden gedetecteerd met ascariasis.

Larven van de intestinale ugristic worden geïdentificeerd met strongyloidiasis.

Eieren van de longblaasjes worden geïdentificeerd met paragonimosis.

Elementen gevonden in sputum bij bronchiale astma. Wanneer astma bronchiale wordt meestal gescheiden door een kleine hoeveelheid slijm, stroperig sputum. Macroscopisch kun je de Kurshman-spiraal zien. Wanneer microscopisch onderzoek kenmerkend is voor de aanwezigheid van eosinofielen, cilindrisch epitheel, zijn er kristallen van Charcot-Leiden.