Confocale levensduur hoornvliesmicroscopie

Confocale microscopie van het hoornvlies is een van de moderne onderzoeksmethoden; het maakt intravitale monitoring van het hoornvlies mogelijk met visualisatie van weefsel op cellulair en microstructureel niveau.

Dankzij het originele ontwerp van de microscoop en het hoge oplossend vermogen ervan, is het met deze methode mogelijk levend hoornvliesweefsel te visualiseren , de dikte van elk van de lagen te meten en de mate van morfologische stoornissen te beoordelen.

Het doel van corneale confocale microscopie

Om de morfologische veranderingen van het hoornvlies te karakteriseren die optreden bij verschillende ontstekings- en dystrofische ziekten, alsook als gevolg van chirurgische ingrepen en blootstelling aan CL.

Morfologische onderzoeksgegevens zijn noodzakelijk om de ernst van het pathologische proces, de effectiviteit van de behandeling en de tactieken voor patiëntbehandeling te beoordelen.

Indicaties voor de procedure

• Ontstekingsziekten van het hoornvlies ( keratitis ).
• Dystrofische ziekten van het hoornvlies ( keratoconus, dystrofie van Fuchs, enz.).
• Droge ogen syndroom.
• Omstandigheden na chirurgische ingrepen aan het hoornvlies (penetrerende hoornvliestransplantatie, keratorefractieve operaties).
• Aandoeningen die verband houden met het dragen van contactlenzen.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Voorbereiding

Dit onderzoek kan zonder verdoving worden uitgevoerd. Een druppel immersievloeistof wordt op de objectieflens van de confocale microscoop geplaatst. Dit elimineert direct contact van de lens met het hoornvlies en minimaliseert het risico op beschadiging van het epitheel.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Techniek confocale microscopie van het hoornvlies

Het onderzoek wordt uitgevoerd met een ConfoScan 4 (Nider) confocale microscoop met een vergroting van 500 keer. Met dit apparaat kan het hoornvlies over de gehele dikte worden onderzocht.

De grootte van het te onderzoeken gebied is 440 × 330 μm, de dikte van de scanlaag is 5 μm. De lens met een druppel gel wordt tegen het hoornvlies gebracht tot deze het raakt en zo geplaatst dat de dikte van de immersievloeistoflaag 2 mm bedraagt. Het ontwerp van het apparaat maakt het mogelijk om het hoornvlies in de centrale zone en de paracentrale gebieden te onderzoeken.

Contra-indicaties voor de procedure

Een relatieve contra-indicatie is ernstige oogirritatie als gevolg van een acuut ontstekingsproces.

[ 10 ], [ 11 ]

Normale prestaties

Normaal morfologisch beeld van het hoornvlies

Het voorste epitheel bestaat uit 5-6 cellagen. De gemiddelde dikte van het gehele epitheel is ongeveer 50 µm. Volgens de morfologische structuur worden de volgende lagen onderscheiden (van binnen naar buiten): basale, priemvormige cellen en oppervlakkige cellen.

• De binnenste (basale) laag wordt vertegenwoordigd door kleine, dichte, cilindrische cellen zonder zichtbare kern. De grenzen van de basale cellen zijn helder en helder.
• De middelste laag bestaat uit 2-3 lagen stekelige (gevleugelde) cellen met diepe instulpingen waarin de uitgroeisels van aangrenzende cellen zijn ingebed. Microscopisch zijn de celgrenzen duidelijk te onderscheiden en de celkernen zijn mogelijk niet of onduidelijk gedefinieerd.
• De oppervlakkige laag van het epitheel bestaat uit een of twee lagen polygonale cellen met duidelijke grenzen en een homogene dichtheid. De kernen zijn meestal helderder dan het cytoplasma, waarin ook een perinucleaire donkere ring te zien is.

Onder de cellen van de oppervlakkige laag worden donkere en lichte cellen onderscheiden. Een verhoogde reflectiviteit van epitheelcellen duidt op een afname van hun stofwisseling en beginnende afschilfering.

Het membraan van Bowman is een transparante structuur die geen licht reflecteert. Normaal gesproken is het daarom onmogelijk om het met confocale microscopie zichtbaar te maken.

De subbasale zenuwplexus bevindt zich onder het membraan van Bowman. Normaal gesproken zien zenuwvezels eruit als heldere strepen die parallel lopen op een donkere achtergrond en elkaar raken. De reflectiviteit (reflectie) kan ongelijkmatig zijn langs de vezel.

Het hoornvliesstroma beslaat 80 tot 90% van de dikte van het hoornvlies en bestaat uit cellulaire en extracellulaire componenten. De belangrijkste cellulaire elementen van het stroma zijn keratocyten; deze vormen ongeveer 5% van het volume.

Een typische microscopische opname van het stroma omvat verschillende heldere, onregelmatige, ovale lichaampjes (keratocytkernen) die in de dikte van een transparante, donkergrijze of zwarte matrix liggen. Normaal gesproken is visualisatie van extracellulaire structuren onmogelijk vanwege hun transparantie. Het stroma kan voorwaardelijk worden onderverdeeld in sublagen: anterior (direct onder het membraan van Bowman gelegen en goed voor 10% van de stromadikte), anterior-midden, midden en posterior.

De gemiddelde dichtheid van keratocyten is hoger in het voorste stroma en neemt geleidelijk af naar de achterste lagen. De dichtheid van voorste stromacellen is bijna twee keer zo hoog als die van achterste stromacellen (als de dichtheid van voorste stromacellen op 100% wordt gesteld, bedraagt de dichtheid van achterste stromacellen ongeveer 53,7%). In het voorste stroma hebben de kernen van keratocyten een ronde, boonvormige vorm, terwijl ze in het achterste stroma ovaal en meer langwerpig zijn.

Keratocytenkernen kunnen in helderheid variëren. Hun vermogen om licht te reflecteren hangt af van hun metabolische toestand. Helderdere cellen worden beschouwd als geactiveerde keratocyten ("stresscellen"), waarvan de activiteit gericht is op het handhaven van de interne homeostase van het hoornvlies. In het normale en gezichtsveld worden enkelvoudige geactiveerde cellen aangetroffen.

Zenuwvezels in het voorste hoornvliesstroma zijn zichtbaar als heldere homogene banden, die vaak vertakkingen vormen.

Het membraan van Descemet is normaal gesproken transparant en kan niet worden waargenomen met behulp van confocale microscopie.

Het achterste epitheel is een monolaag van hexagonale of polygonale, platte cellen met een gelijkmatig licht oppervlak tegen een achtergrond van heldere, donkere intercellulaire grenzen.

Het apparaat kan de celdichtheid, hun oppervlakte en de variabiliteitscoëfficiënt handmatig of automatisch berekenen.

Pathologische veranderingen in de structuur van het hoornvlies

Keratoconus wordt gekenmerkt door aanzienlijke veranderingen in het voorste epitheel en het stroma van het hoornvlies.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]