Confocale intravitale microscopie van het hoornvlies

Confocale microscopie van het hoornvlies is een van de moderne onderzoeksmethoden; maakt het mogelijk om intravitale monitoring van de hoornvliesstatus uit te voeren met visualisatie van weefsels op cellulair en microstructureel niveau.

Deze methode maakt het, dankzij het originele ontwerp van de microscoop en de hoge resolutie, mogelijk levende weefsels van het hoornvlies te visualiseren , de dikte van elk van zijn lagen te meten en de mate van morfologische verstoringen te beoordelen.

Het doel van confocale microscopie van het hoornvlies

Karakteriseren de morfologische veranderingen in het hoornvlies, die het gevolg zijn van verschillende inflammatoire en dystrofische ziekten, evenals van chirurgische ingrepen en de effecten van CR.

Morfologische gegevens zijn nodig om de ernst van het pathologische proces, de effectiviteit van de behandeling en de tactiek van het patiëntenbeheer te bepalen.

Indicaties voor de procedure

• Ontstekingsziekten van het hoornvlies ( keratitis ).
• Dystrofische ziekten van het hoornvlies ( keratoconus, Fuchs-dystrofie, enz.).
• Syndroom van "droge ogen".
• Aandoeningen na chirurgische ingrepen op het hoornvlies (via hoornvliestransplantatie, keratorefractieve operaties).
• Condities geassocieerd met het dragen van contactlenzen.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9]

Voorbereiding

Deze studie is mogelijk zonder het gebruik van anesthetica. Een druppel onderdompelingsvloeistof wordt op de lens van de confocale microscooplens geplaatst. Dit elimineert het directe contact van de lens met het hoornvlies en minimaliseert het risico van epitheliale schade.

[10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18],

Techniek confocale microscopie van het hoornvlies

De studie wordt uitgevoerd op een confocale microscoop ConfoScan 4 (Nider) met een toename van 500 keer. Met het apparaat kunt u het hoornvlies over de gehele dikte onderzoeken.

De grootte van de onderzochte zone is 440 x 330 μm, de dikte van de scanlaag is 5 μm. Een lens met een druppel gel wordt naar het hoornvlies gebracht om aan te raken en in te stellen zodat de dikte van de laag onderdompelingsvloeistof 2 mm is. Met het ontwerp van het apparaat kunt u het hoornvlies in de centrale zone en de paracentrale gebieden onderzoeken.

Contra-indicaties voor de procedure

Otnosytelnoe Contra vыrazhennoe Stimulatie oog op de achtergrond van acute ontstekingsproces.

[19], [20], [21], [22], [23]

Normale prestaties

Normaal morfologisch beeld van het hoornvlies

Het anterieure epitheel bestaat uit 5-6 lagen cellen. De gemiddelde dikte van het gehele epitheel is ongeveer 50 μm. Volgens de morfologische structuur worden de volgende lagen onderscheiden (van binnen naar buiten): basaal, subulaat en oppervlakkig.

• De binnenste (basale) laag wordt weergegeven door kleine dichte cilindrische cellen zonder zichtbare kern. De randen van de basale cellen zijn helder en helder.
• De middelste laag bestaat uit 2-3 lagen wervelkolom-vormige (gevleugelde) cellen met diepe invaginaties, waarin uitlopers van aangrenzende cellen worden gebouwd. Microscopisch zijn celgrenzen redelijk goed te onderscheiden, en de kernen zijn mogelijk niet gedefinieerd of wazig.
• De oppervlaktelaag van het epitheel wordt weergegeven door een of twee lagen polygonale cellen met duidelijke grenzen en een homogene dichtheid. De kernen zijn meestal helderder dan het cytoplasma, waarin men ook een bijna-kern donkere ring kan onderscheiden.

Maak tussen de cellen van de oppervlaktelaag onderscheid tussen donker en licht. De verhoogde reflectiviteit van epitheliale cellen duidt op een afname van het metabolisme in hen en het begin van hun desquamatie.

Het Bowman-membraan is een transparante structuur die geen licht reflecteert, dus het is onmogelijk om het te visualiseren wanneer een confocale microscopie wordt uitgevoerd.

Subbasische zenuwplexus bevindt zich onder het Bowman-membraan. Normaal gezien zien de zenuwvezels eruit als heldere stroken die parallel lopen op een donkere achtergrond en contact maken met elkaar. Reflectiviteit (reflectiviteit) kan ongelijk zijn in vezellengte.

Het stroma van het hoornvlies beslaat 80 tot 90% van de dikte van het hoornvlies en bestaat uit een cellulaire en extracellulaire component. De elementaire cellulaire elementen van het stroma zijn keratocyten; vormen ongeveer 5% van het volume.

Een typisch microscopisch patroon van het stroma omvat verschillende heldere onregelmatige ovaalvormige lichamen (keratocytenkernen) die in de dikte van een transparante donkergrijze of zwarte matrix liggen. Normaal gesproken is visualisatie van extracellulaire structuren onmogelijk vanwege hun transparantie. Het stroma kan voorwaardelijk worden onderverdeeld in sublagen: anterieure (direct onder het Bowman-membraan en vormt 10% van de dikte van het stroma), anterior, middle en posterior.

De gemiddelde dichtheid van keratocyten is hoger in het voorste stroma, geleidelijk neemt hun aantal af naar de achterste lagen. De dichtheid van de cellen van het voorste stroma is bijna tweemaal zo groot als die van de cellen van het achterste stroma (als de dichtheid van de cellen van het voorste stroma als 100% wordt genomen, is de dichtheid van de cellen van het achterste stroma ongeveer 53,7%). In het voorste stroma hebben de kernen van keratocyten een ronde boonvormige vorm, en in het achterste ovaal en meer langwerpig.

De kernen van keratocyten kunnen qua helderheid verschillen. Het verschillende vermogen om licht te reflecteren, is afhankelijk van hun metabolische toestand. Helderdere cellen worden beschouwd als geactiveerde keratocyten ("stress-cellen"), waarvan de activiteiten gericht zijn op het handhaven van de inwendige corneale homeostase. In de norm en het gezichtsveld zijn er enkele geactiveerde cellen.

Zenuwvezels in het voorste stroma van het hoornvlies worden gevisualiseerd als heldere homogene banden, waarbij vaak bifurcaties worden gevormd.

Het descemet-membraan is normaal transparant en wordt niet gevisualiseerd door confocale microscopie.

Het posterieure epitheel is een monolaag van hexagonale of veelhoekige platte cellen met een uniform licht oppervlak tegen een achtergrond van verschillende donkere intercellulaire grenzen.

Het apparaat biedt de mogelijkheid van handmatige of automatische berekening van celdichtheid, hun oppervlakte en de variabiliteitscoëfficiënt.

Pathologische veranderingen in de structuur van het hoornvlies

Keratoconus wordt gekenmerkt door significante veranderingen in het anterieure epitheel en het stroma van het hoornvlies.

[24], [25], [26], [27], [28], [29], [30], [31], [32], [33]