Immunologisch onderzoek in de urologie

Toewijzing van een immunogram aan een urologische patiënt betekent dat de behandelende arts de aanwezigheid van stoornissen in het immuunsysteem aanneemt. Dupliceren bacteriële, virale, schimmelinfecties, allergische reacties, kunnen systemische ziekten symptomen van deze aandoeningen, die worden gekenmerkt door een aantal syndromen (infectie, kanker, allergische, auto-immuun, lymfoproliferatieve). Eén patiënt kan verschillende syndromen hebben. Zo kan bijvoorbeeld chronische infectieziekten (besmettelijke syndroom) immuundeficiëntie veroorzaken en immune deficiency gemanifesteerd kan worden aanleg voor besmettelijke ziekten en kanker (Cancer Syndrome). Predispositie voor infecties kan optreden tegen een achtergrond van secundaire immunodeficiëntie, die is ontstaan als gevolg van een lymfoproliferatieve ziekte, zoals leukemie. Er zijn drie hoofdgroepen van pathologische veranderingen in het immuunsysteem:

• de kwantitatieve of functionele insufficiëntie van een of andere link van immuniteit, die leidt tot de ontwikkeling van een immunodeficiëntie;
• een schending van de herkenning van het antigeen door het immuunsysteem, leidend tot de ontwikkeling van auto-immuunprocessen;
• hyperreactieve of "perverse" immuunrespons, gemanifesteerd door de ontwikkeling van allergische ziekten.

Er zijn screening (tests van niveau 1) en kwalificerende (tests van de 2-niveau) methoden van immunodiagnostiek. De eerste bestaan om schendingen in het immuunsysteem te verhelpen, de laatste - om de mechanismen te identificeren die betrokken zijn bij de implementatie ervan met het oog op verdere immunocorrectie.

B-cellulaire link van immuniteit

Screeningsmethoden

• Bepaling van de relatieve en absolute aantal B-lymfocyten door immunofluorescentie of flowcytometrie onder gebruikmaking van monoklonale antilichamen tegen B-cel-antigenen (CD19, CD20, waarbij CD - CD-merker). Het B-lymfocytgehalte is normaal bij volwassenen: 8-19% van het totale aantal leukocyten of 190-380 cellen / μl. Het gehalte aan B-lymfocyten treedt bij acute en chronische bacteriële en schimmelinfecties, chronische leverziekte, systemische bindweefselziekten, chronische lymfocytische leukemie, multiple myeloma.
• Bepaling van de concentratie van immunoglobulinen nespespetsificheskih (F, M, G, E) door enkelvoudige radiale immunodiffusie of turbometrii nefelometrie, radioimmunoassay of enzymimmunoassay (EIA). Normen voor volwassenen: immunoglobuline (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Een toename in de concentratie van immunoglobulinen treedt op bij dezelfde pathologische aandoeningen waarbij een toename van het gehalte aan B-lymfocyten optreedt. Verlagen van de concentratie van immunoglobulinen bij aangeboren hypogammaglobulinemie, tumoren van het immuunsysteem, het verwijderen van de milt, eiwitverlies, bij ziekten van de nieren en darmen, behandeling met cytostatica en immunodepreesantami.

Methoden opgeven

• Bepaling van circulerende immuuncomplexen in het bloed door selectieve precipitatie in polysileenglycol gevolgd door spectrofotometrische dichtheidsbeproeving (normaal 80-20 UE). Toename van circulerende immuuncomplexen is kenmerkend voor acute bacteriële, schimmel-, virale infecties, auto-immuunziekten, immunocomplexziekten, serumziekte, allergische reacties van type 3;
• Bepaling van specifieke immunoglobulinen in het bloed ten opzichte van bacteriële en virale antigenen, deoxyribonucleïnezuur (DNA) bij auto-immuunziekten, de identificatie van zaadcellen (autoimmune onvruchtbaarheid) en protivopochechnyh antilichamen (pyelonefritis en glomerulonephritis) door radiale immunodiffusie of ELISA.
• Bepaling van antistoffen in sperma [MAR-proef (mixed antiglobulinereactie - mixed antiglobuline respons)], norm - negatief.
• Bepaling van de concentratie van immunoglobulinen in de urine met het oog op de differentiële diagnose van pyelonefritis en glomerulonefritis (selectiviteit van proteïnurie).
• Bepaling van IgE in het prostaatsap voor de diagnose van allergische prostatitis door radiale immunodiffusie of ELISA. 
• Onderzoek in responsie blasttransformation reactie van lymfocyten B op een B-cel mitogeen (karmozijnbes mitogeen voor stimulatie van blasttransformation reactie van B-lymfocyten in aanwezigheid van T-lymfocyten), waarbij de standaardwaarde van 95-100%.

T-cel koppeling van immuniteit

Screeningsmethoden

• Bepaling van de relatieve en absolute aantal CD3 rijpe T-lymfocyt reactie door immunofluorescentie of flowcytofluorometrie behulp van anti-SDZ monoklonale antilichamen. De norm voor volwassenen is 58-76% of 1100-1700 cellen / μl. Vermindering van het aantal T-lymfocyten uitvaldisplay cel immuniteit. Dit is kenmerkend voor een aantal secundaire en immuundeficiënties (chronische bacteriële en virale infecties: tuberculose, verworven immuundeficiëntiesyndroom, kanker, chronisch nierfalen, trauma, stress, veroudering, slechte voeding, behandeling met cytotoxische geneesmiddelen, ioniserende straling). Het verhogen van het aantal T-lymfocyten is tegen de achtergrond van het immuunsysteem van hyperactiviteit of lymphoproliferatieve ziekten. Bij ontsteking neemt het aantal T-lymfocyten eerst toe en neemt dan af. De afwezigheid van een afname van T-lymfocyten suggereert de chronicisatie van het ontstekingsproces.
• Beoordeling van de subpopulaties van lymfocyten.
  • Bepaling van het aantal T-helpers (anti-CD4 antilichaam). Normaal gesproken, 36-55% of 400-1100 cellen / μl. Een toename in het aantal van deze cellen vindt plaats bij auto-immuunziekten, de ziekte van Waldenström, activering van antigrafische implantatie; vermindering van het aantal T-helpercellen gebeurt bij chronische bacteriële, virale, protozoaire infecties, tuberculose, verworven immuundeficiëntiesyndroom, maligniteiten, brandwonden, trauma, ondervoeding, veroudering, cytostatica behandeling ioniserende straling.
  • Bepaling van het aantal T-suppressors (anti-CD4 antilichaam). Normaal 17-37% of 300-700 cellen / μl. Een toename in het aantal T-suppressors treedt op onder dezelfde omstandigheden waarin het aantal T-helpers afneemt, en hun afname onder dezelfde omstandigheden, wanneer de inhoud van T-helpers toeneemt.
  • Immunoregulatorische index CD4 / CD8, in de norm 1,5-2,5. Hyperactiviteit bij snelheden hoger dan 2,5 (allergische en auto-immuunziekten); hypoactiviteit - minder dan 1,0 (aanleg voor chronische infecties). Bij het begin van het ontstekingsproces stijgt de immunoregulatorische index en als deze zakt, normaliseert deze.

Methoden opgeven

• Bepaling van het aantal natuurlijke killers (NK-cellen) - anti-CD16- en anti-CD56-antilichamen. De norm voor CD 16-lymfocyten is 6-26%, CD56 - 9-19%. Verhoging van het aantal NK-cellen optreedt bij transplantaatafstoting, afname - bij virale infecties, kanker, congenitale en verworven immuundeficiënties, brandwonden, trauma en stress, behandeling met cytostatica en ioniserende straling. 
• Bepaling van het aantal T-lymfocyten met de receptor voor interleukine-2 (activeringsmarker) - anti-CD25-antilichamen. De norm is 10-15%. Een toename van hun aantal wordt waargenomen bij allergische aandoeningen, transplantaatafstoting, respons op thymus-afhankelijke antigenen in de acute periode van primaire infectie, afname van dezelfde ziekten waarbij het aantal NK-cellen afneemt.
• Onderzoek van de expressie van de activeringsmarker - het histocompatibiliteitsmolecuul van klasse II HLA-DR. Verhoogde expressie treedt op bij ontstekingsprocessen, bij patiënten met hepatitis C, coeliakie, syfilis, acute luchtweginfecties.
• Evaluatie van apoptose van lymfocyten. Een indicatie van de bereidheid van lymfocyten apoptose kan worden geïdentificeerd door hun expressie van oppervlakte-Fas-receptor (CD95) in mitochondria en bd-2 proto-oncogen. Apoptose werd geëvalueerd door lymfocyt verwerking twee fluorescente kleurstoffen: propidium jodide, dat bindt aan de DNA-fragmenten en Y annexine binding aan fosfatidylserine aan het celmembraan opgenomen in vroege apoptose. Evaluatie van de resultaten wordt uitgevoerd op een flow-cytofluorimeter. De berekening van de resultaten is gebaseerd op de verhouding van cellen gekleurd met verschillende kleurstoffen. Ongekleurde cellen levensvatbaar cellen, alleen geassocieerd met de annexine de Y, - vroege tekenen van apoptose, met propidiumjodide en annexine I - late manifestaties van apoptose, kleuring alleen propidiumjodide aangeeft necrose.
• Evaluatie van de proliferatie van T-lymfocyten in vitro.
  • Verandering in celblastogenese is een reactie van de blast-transformatie van lymfocyten. Leukocyten worden geïncubeerd met elk mitogeen van plantaardige oorsprong (lectinen). Vaker gebruikte fytohemagglutinine gedurende 72 uur, maak dan een uitstrijkje, beits het en tel het aantal ontploffingen! De stimulatie-index is de verhouding van het percentage getransformeerde cellen in het experiment (kweek met fytohemagglutinine) tot het percentage getransformeerde cellen in de controle (kweek zonder fytohemagglutinine). De reactie van de blast-transformatie van lymfocyten kan worden vastgesteld door het opnemen van een radioactief label (ZN-thymdin) in gekweekte cellen, omdat de DNA-synthese toeneemt bij het delen van cellen. Stoornissen in de proliferatieve respons treden zowel op in primaire als secundaire immunodeficiënties die zijn geassocieerd met infecties, oncologische ziekten, nierinsufficiëntie en chirurgische ingrepen.
  • Evaluatie van deze studies, de expressie van activatie merkers (CD25, transferrinereceptor tot - CD71) moleculen en MHC klasse II HLA-DR, die nagenoeg afwezig op rustende T-lymfocyten. T-lymfocyten gestimuleerd met fytohemagglutinine na 3 dagen expressie activatie merkers werden geanalyseerd door directe of indirecte immunofluorescentie, flowcytometrie onder gebruikmaking van monoklonale antilichamen die worden uitgescheiden receptoren.
  • Meten van de hoeveelheid mediatoren gesynthetiseerd door geactiveerde T-lymfocyten [interleukine (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferon, etc.], door radioimmunoassay of ELISA. Vooral belangrijk is de evaluatie van de concentratie van y-interferon en IL-4 als markers van TH en Th2 in de supernatant van geactiveerde kweken en in de cel. Indien mogelijk, is het nuttig om de expressie van het gen te bepalen voor de betreffende cytokine door het niveau van messenger ribonucleïnezuur in het threonine producerende cel en receptor expressie intensiteiten voor de respectieve cytokinen.
    
• De reactie van remming van migratie van lymfocyten. Gevoelig gemaakte T-lymfocyten in de reactie met de antigeenafgifte lymfokinen, inclusief factoren. Remming van de migratie van lymfocyten. Het fenomeen van remming wordt waargenomen wanneer mitogenen in de kweek van cellen worden geïntroduceerd. Evaluatie van de mate van remming maakt het mogelijk om het vermogen van lymfocyten om cytokinen af te geven te beoordelen. Normaal gesproken is de migratiefrequentie, afhankelijk van het specifieke mitogeen, 20-80%.
• Evaluatie van cytotoxiciteit van NK-cellen. Bepaal het vermogen van natuurlijke killercellen om doelcellen van de erythromyeloïde lijn K-562 te doden. Als antilichaam-afhankelijke cytotoxiciteit wordt geëvalueerd, worden doelwitcellen gecoat met IgG-antilichamen gebruikt. Doelcellen worden gemerkt met 3H-uridine en geïncubeerd met effectorcellen. De dood van doelwitcellen wordt geschat op basis van de afgifte van het radioactieve label in de oplossing. Vermindering van cytotoxiciteit vindt plaats met kwaadaardige gezwellen. In sommige gevallen, wanneer een prognose van de effectiviteit van behandeling met interleukinen vereist is, wordt de cytotoxiciteit van NK-cellen geëvalueerd wanneer deze met bepaalde cytokinen wordt geïncubeerd.

Onderzoek naar de functie van fagocyten

Screeningsmethoden

Onderzoek naar de absorptie van microbiële cellen door fagocyten (fagocytose van latexdeeltjes, testkweek van stafylokokken, Escherichia coli of micro-organismen geïsoleerd van de patiënt). Door het gehepariniseerde bloed te centrifugeren, wordt een suspensie van leukocyten geïsoleerd, serum van de IV-bloedgroep wordt toegevoegd voor opsonisatie (opsoninen zijn eiwitten die fagocytose versterken). De microbiële suspensie wordt verdund, gemengd met leukocyten en gedurende 120 min geïncubeerd, bemonstering voor analyse na 30,90, 120 min. Na de start van de incubatie. Van de geselecteerde leukocytsuspensies worden uitstrijkjes gemaakt. Bepaal de volgende indicatoren van fagocytose:

• fagocytische index - het percentage cellen dat fagocytose binnenkwam in 30 minuten en 120 minuten incubatie; normatieve waarde van de fagocytische index (30) 94% van de fagocytische index (120) - 92%;
• fagocytisch aantal - het gemiddelde aantal bacteriën dat intracellulair is; de normatieve waarde van fagocytisch getal (30) 11%, fagocytisch getal (120) - 9,8%;  
• coëfficiënt van fagocytisch aantal - verhouding van fagocytisch getal (30) tot fagocytisch getal (120); normaal 1,16;
• de bacteriedodende index van neutrofielen is de verhouding van het aantal microben dat is gedood in de fagocyten tot het totale aantal opgenomen microben; in de norm van 66%.

Methoden opgeven

• Onderzoek naar de bactericide activiteit van fagocyten in de test met nitrosine tetrazolium (NST) is de NST-test. Aan de leukocyten wordt kleurstof lachgas tetrazolium toegevoegd in geel. Wanneer de kleurstof wordt geabsorbeerd door het neutrofiel, vindt het reductieproces plaats onder de werking van vrije radicalen van zuurstof, resulterend in een blauwe kleuring. De reactie wordt uitgevoerd in een platbodemplaat met 96 putjes. In de eerste drie putjes met een mengsel van HCT en leukocyten wordt een Hanks-oplossing (spontane HCT) toegevoegd, in de laatste - latexdeeltjes; incubeer gedurende 25 minuten bij 37 ° C. De resultaten worden gelezen bij 540 nm op de lezer en uitgedrukt in conventionele eenheden. Bereken de stimulatiefactor (K _st ), gelijk aan de verhouding van de optische dichtheid in de gestimuleerde putten tot de gemiddelde optische dichtheid in de putjes zonder stimulatie. Bij gezonde mensen is _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Onderzoek naar adhesiemoleculen. Met behulp van flowcytofluorimetrie wordt de expressie van oppervlakte-antigenen CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 bepaald. Immunodeficiënties met schending van adhesie komen tot uiting door relapsing-infecties, langzame genezing van wonden en afwezigheid van pus in de foci van infectie.

Onderzoek naar het complementsysteem

Screeningsmethoden

Bepaling van hemolytische activiteit van complement - een studie van de klassieke route van complementactivatie. Verschillende verdunningen van het serum van de patiënt en een gezond persoon worden toegevoegd aan de erythrocyten van een ram bedekt met antilichamen. Een eenheid van hemolytische activiteit wordt genomen als het omgekeerde van de verdunning van serum, waarbij 50% van de erytrocyten wordt vernietigd. De mate van hemolyse wordt fotometrisch beoordeeld door de opbrengst aan hemoglobine in de oplossing. Vermindering van hemolytische activiteit van complement wordt waargenomen in systemische lupus erythematosus met nierbetrokkenheid, acute glomerulonefritis. Gecombineerde immunodeficiënties, myasthenia gravis, virale hepatitis, lymfomen, toenemen - met obstructieve geelzucht, thyroïditis Hashimoto. Reuma, reumatoïde artritis, nodulaire periarteritis. Dermatomyositis, myocardiaal infarct, colitis ulcerosa, syndroom van Reiter, jicht.

Methoden opgeven

• Bepaling van complementcomponenten. De kwantitatieve bepaling wordt uitgevoerd door de methode van radiale immunodiffusie en nefelometrie.
  De studie is niet informatief, tenzij de antigene eigenschappen van complementcomponenten zijn veranderd.
• Er werd gevonden dat de Clq-component van complement fagocytose versterkt en cellulaire cytotoxiciteit medieert. De afname ervan treedt op bij ziekten van immuuncomplexen, systemische lupus erythematosus, etterende infecties en tumoren.
• De C3-component neemt deel aan de activering van de klassieke en alternatieve complementroute. Vermindering van de concentratie is geassocieerd met chronische bacteriële en schimmelinfecties, de aanwezigheid van circulerende of weefselimmuuncomplexen.
• De C4-component neemt deel aan de activering van de klassieke route. Vermindering van de concentratie is geassocieerd met een langdurige activatie van complement door immuuncomplexen en een afname van de concentratie van de C1-remmer, die de activering van de klassieke complementroute stuurt. C4-tekort treedt op bij systemische lupus erythematosus, een toename van C4 treedt op bij nieraandoeningen, afstoting van transplantaten, acute ontsteking en ziekten van het maag-darmkanaal.
• C5a is een klein fragment van het C5-molecuul, afgesplitst als gevolg van activering van het complementsysteem. Toename van de concentratie treedt op bij ontstekingen, sepsis, atopische en allergische aandoeningen.
• Cl-remmer is een multifunctionele factor. Het controleert de activering van de C1-component van complement, remt de activiteit van kallikreïne, plasmine en geactiveerde factor Hageman, proteasen Cls en Or. Een tekort aan C1-remmer leidt tot angio-oedeem.
• aanvullende studies. Aan het standaardserum dat een complementcomponent mist, wordt het testserum toegevoegd en wordt de hemolytische activiteit van het complement bepaald. Als de hemolytische activiteit niet normaal wordt hersteld, wordt aangenomen dat de activiteit van deze complementcomponent in het testserum is verminderd.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]